La proteina Vpr de HIV-1 afecta negativamente la actividad telomerasa de astrocitos

OJEDA D.; QUARLERI J.

Vaquerias

Jornada; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Microbiología; 2012

Sociedad Argentina de Virologia

Introducción:La infección por HIV-1 frecuentemente conduce a un amplio espectro de enfermedades neurodegenerativas. Entre las células del sistema nervioso central (SNC), los astrocitos son susceptibles a la infección por HIV-1, aunque ésta resulta no productiva.Vpr es una proteína viral que se asocia a la afecta la perdida de funcionalidad neuronal ya que induce astrogliosis, apoptosis, y secreción de neurotoxinas, lo que sugiere que esta proteína desempeña un rol fundamental en la neuropatogenesis asociada a HIV-1 (HAD).La telomerasa es una ribonucleoproteina con actividad de retrotranscriptasa cuya función canónica es la elongación de los extremos cromosómicos que se acortan periódicamente en cada ronda de división celular, sin embargo desempeña funciones extranucleares, brindando protección contra la apoptosis y el estrés oxidativo. Considerando que HIV-1 afecta la actividad telomerasa (AT) y en consecuencia regula los procesos de envejecimiento celular, el objetivo de nuestro trabajo fue evaluar el impacto de la expresión de la proteína Vpr sobre la TA en astrocitos. MetodologíaLa secuencia codificante para Vpr de la cepa de HIV-1 NL4-3 fue amplificada por PCR y clonada en el vector de expresión pEGFP-C3. Cultivos de la línea celular astrocitaria humana U373 fueron transfectados con el vector pEGFP-Vpr, y la actividad telomerasa fue evaluada por PCR en Tiempo Real (expresada como Actividad Telomerasa Relativa, ATR), 48 hs post-transfección. Células transfectadas con pEGFP-C3 y células sin transfectar fueron utilizadas como control. La eficiencia de transfección, expresada como porcentaje de células GFP positivas, fue evaluada por citometría de flujo. Todos los experimentos se realizaron por duplicado. El análisis estadístico fue realizado por la prueba t-student.ResultadosLos resultados obtenidos mostraron que la expresión de Vpr en células astrocitarias U373 redujo significativamente la AT (25.7% ATR, p