EFECTO DE LA HIPOXIA SOBRE LA REGULACIÓN DE MIR-210 Y LA DIFERENCIACIÓN A MESODERMO CARDÍACO DE CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES HUMANAS

LEONARDO ROMORINI; XIMENA GARATE; GABRIEL NEIMAN; CARLOS LUZZANI; MARÍA ELIDA SCASSA; GUSTAVO SEVLEVER; SANTIAGO G. MIRIUKA

Congreso; LIX Congreso de SAIC; 2014

Las células madre pluripotentes embrionarias e inducidas hu- manas (CMEh y CPIh) poseen gran capacidad de diferenciación in vitro y potencialidad para ser usadas en medicina regenerativa. Los primeros estadíos de la embriogénesis evolucionan en un ambiente hipóxico. Por esto, nuestro objetivo fue estudiar los efectos de la hipoxia durante la auto-renovación y diferenciación de CMEh y CPIh, poniendo especial énfasis en la regulación de microRNAs y la diferenciación a mesodermo cardíaco. Células H9 (CMEh) y FN2.1 (CPIh) en estado indiferenciado fueron cultivadas en hipoxia (5, 3 y 1% O2). Utilizando stem loop primers específicos medimos por RT-qPCR los niveles de microRNAs regulables por hipoxia (mIR-210, mIR-328 y mIR-150). Observamos que a me- dida que disminuyeron los niveles de O2, aumentaron los niveles de expresión de genes blanco, vegf y bnip-3, de HIF-1α (factor de transcripción regulado por hipoxia) y de mIR-210. Mediante el agregado de deferroxamina, cloruro de cobalto o DMOG (inhiben la degradación de HIF-1α) provocamos hipoxia química. Tratamos H9 y FN2.1 con concentraciones crecientes de estos compues- tos y, por RT-qPCR, observamos un incremento en los niveles de bnip-3 y mIR-210. Analizamos luego el efecto de la hipoxia (5%O2) durante la diferenciación de H9 a cardiomiocitos. Los ni- veles de expresión de bnip-3 y de mIR-210 aumentaron tanto en normoxia como en hipoxia, alcanzándose niveles más elevados en hipoxia. Sin embargo, los marcadores de linaje cardíaco nkx2.5, cTnT y myh6 resultaron más bajos en hipoxia. No obstante, no hubo diferencias entre los niveles de expresión de marcadores tempranos de mesodermo, brachyury y mesp-1. Determinamos que mIR-210 es regulado por hipoxia (física y química) durante la auto-renovación y diferenciación cardíaca de CMEh y CPIh. Más aún, la diferenciación dirigida a mesodermo cardíaco en condiciones sostenidas de hipoxia sería menos efectiva.