ESTUDIO DE MICRORNAS QUE PARTICIPAN DE LA TRANSICIÓN EPITELIO MESENQUIMAL A PARTIR DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS

XIMENA GARATE; GABRIEL NEIMAN; LEONARDO ROMORINI; GUSTAVO SEVLEVER; SANTIAGO G. MIRIUKA

Congreso; LIX Congreso de SAIC; 2014

Durante la cardiomogénesis las células pluripotentes van sufriendo distintos cambios hasta obtener las características de mesodermo cardíaco, siendo uno de ellos la transición epitelio mesenquimal (TEM). Se conocen varios microRNAs que parti- cipan de dicho proceso en células tumorales. Nuestro objetivo fue analizar si estos microRNAs participan de la TEM durante la diferenciación de células madre embrionarias humanas (CMEh) a mesodermo. Las CMEh (H9) se diferenciaron a un progenitor de mesodermo temprano (PMT) creciéndolas en adhesión durante 3.5 días y estimulándolas con los morfógenos BMP-4, Activina-A, bFGF y VEGF. Este progenitor fue caracterizado por citometría de flujo basándonos en la ausencia de CD326 (Ep-CAM) y la expresión de CD56 (N-CAM), y representa el 10±3% de la pobla- ción total al día 3.5. Mediante qRT-PCR determinamos que los niveles de expresión del miR-200c y el miR-205 varían luego de la transición (9,11±4,80 y 0,14±0,04 veces de inducción vs. día 0, respectivamente). A su vez, determinamos que en el PMT genes característicos de la TEM como Vimentina y los inhibidores de E-cadherina (ZEB1, ZEB2, Snai1 y Snai2) aumentan sus niveles de expresión y que los de E-cadherina disminuyen. Por otro lado, buscamos determinar si la señalización por TGFβ participa en la entrada a la TEM, dado que esta vía induce la expresión de diversos factores de transcripción que regulan dicho proceso en células tumorales. Para esto, se diferenciaron células H9 a PMT en presencia o ausencia de los inhibidores de TGFβ, Dor- somorfina (2μM) y SB431542 (10μM), y por citometría de flujo determinamos que al bloquear esta vía el porcentaje de células que sufren la transición disminuye (50% y 99%, respectivamen- te), al igual que la expresión del miR205, miR200c, ZEB1, ZEB2, Snai1, Snai2 y E-cadherina. Podemos concluir que durante la TEM de CMEh la vía de señalización de TGFb sería necesaria y que el miR205 y el miR200c podrían estar involucrados en la regulación de dicho proceso.