INVESTIGADORES
MIRIUKA Santiago Gabriel
congresos y reuniones científicas
Título:
EFECTOS DE LA HIPOXIA DURANTE LA REPROGRAMACIÓN DE CÉLULAS SOMÁTICAS A CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS HUMANAS
Autor/es:
MARÍA QUESTA; GABRIEL NEIMAN; CLAUDIA SOLARI; LEONARDO ROMORINI; GUSTAVO SEVLEVER; ALEJANDRA GUBERMAN; SANTIAGO G. MIRIUKA
Reunión:
Congreso; LIX Congreso de SAIC; 2014
Resumen:
Las células somáticas humanas pueden ser reprogramadas a
Células Madre Pluripotentes Inducidas (CMPi), las cuales pueden
diferenciarse a cualquier célula adulta. Esta característica es de
gran interés en medicina regenerativa y en el estudio in vitro de
enfermedades genéticas. En trabajos anteriores hemos generado
distintas líneas de CMPi por transducción lentiviral bajo condi-
ciones de normoxia e hipoxia, a partir de fibroblastos humanos.
Al finalizar el proceso de reprogramación se compararon las
eficiencias de generación de CMPi en las dos condiciones de
oxígeno a través del conteo de colonias, para así establecer cuál
es el método más efectivo. Las líneas fueron luego validadas y
caracterizadas, además de evaluarse la expresión de marcadores
de pluripotencia y blancos de hipoxia en cultivo hipóxico crónico
o agudo sobre líneas establecidas con al menos 5 pasajes. En
el presente trabajo nos interesó profundizar en el estudio de las
diferencias encontradas en la eficiencia de reprogramación según
el nivel de oxígeno, para lo cual se repitieron los experimentos
de reprogramación aumentando el tamaño muestral y estudiando
el proceso a través de distintas metodologías. Luego, a fin de
dilucidar a qué se debían las diferencias se analizó el proceso de
reprogramación por In-Cell Western Blot, se investigó el estado
proliferativo de las líneas a través de un método de cuantificación
de ácidos nucleicos y un estudio de viabilidad, y se analizó el
estado apoptótico de las células a través de citometría de flujo
para Anexina V. Los resultados obtenidos indican que la hipoxia
aumenta la cantidad de colonias de CMPi bona fide generadas;
sin embargo, encontramos que la expresión de marcadores de
pluripotencia es menor que en normoxia, y el resultado final
de un mayor número de células reprogramadas se debe a una
mayor tasa de proliferación celular durante el cultivo hipóxico
post-reprogramación y no al número inicial de células que sufren
una reprogramación nuclear.