LA ISOFORMA DE FIBRONECTINA QUE INCLUYE EL EXÓN EDA INDUCE UN AUMENTO EN LA PROLIFE- RACIÓN TANTO DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS DE RATÓN COMO HUMANAS INCREMENTANDO LA PROPORCIÓN DE CÉLULAS EN FASE S DEL CICLO CELULAR

NOELIA LOSINO; CLAUDIA SOLARI; ARIEL WAISMAN; CARLOS LUZZANI; SOLEDAD COSENTINO; ALINA SASSONE; DARÍO FERNÁNDEZ ESPINOSA; ANDRES MURO; SANTIAGO G. MIRIUKA; LINO BARAÑAO; ALEJANDRA S. GUBERMAN

Mar del Plata

Congreso; LVIII Cogreso de SAIC; 2013

SAIC

Las células madre embrionarias (CME) poseen la capacidad de auto-renovarse indefinidamente in vitro y de dar origen a células de las tres capas embrionarias, propiedad conocida como pluri- potencia, lo que las convierte en una herramienta promisoria en medicina regenerativa. Anteriormente, demostramos mediante el ensayo de MTT que una isoforma de fibronectina (FN) que incluye el exón EDA (FN EDA+) aumentaba la proliferación de CME de ratón. En este trabajo, con el propósito de extender y profundizar dicho hallazgo, estudiamos si esta molécula también aumentaba la proliferación de CME humanas. Asimismo, con el objetivo de analizar si FN EDA+ alteraba la proporción de células en fase S, evaluamos este parámetro mediante la incorporación del análo- go de nucleótido BrdU. Mediante dos abordajes experimentales diferentes proporcionamos FN EDA+ a las CME humanas y CME de ratón. Por un lado, utilizamos medios condicionados por líneas de fibroblastos embrionarios (MEF) provenientes de ratones mo- dificados genéticamente. Los MEF derivados de ratones wild type expresan ambas isoformas (FN EDA+ y FN EDA-); los MEF +/+ tienen modificado el sitio de splicing, de tal forma que siempre incluyen EDA y finalmente, los MEF -/-, secretan solo FN EDA-, dado que carecen de dicho exón. Por otra parte, suplementamos el medio de proliferación estándar (MP) con un péptido recom- binante correspondiente a una porción de FN que incluye o no EDA. Mediante los ensayos de cristal violeta, sanado de herida y/o BrdU demostramos que la presencia de este dominio indujo un aumento de proliferación en todos los casos. Asimismo, observa- mos que tanto en CME humanas como de ratón, la proporción de células en fase S del ciclo celular resultó mayor en presencia de EDA. El aumento de la proliferación inducido por esta molécula en ambas especies sugiere un posible mecanismo conservado. Esperamos contribuir a mejorar las condiciones de cultivo para la futura aplicación terapéutica de las células madre.