INVESTIGADORES
PODHAJCER Osvaldo Luis
congresos y reuniones científicas
Título:
Inhibición de posibles reguladores de la producción plaquetaria en megacariocitos (MK) primarios mediante ARN de interferencia
Autor/es:
GLEMBOTSKY AC; GLEMBOTSKY AC; MARTA RF; RASLOVA H; PODHAJCER O; MOLINAS FC; HELLER PG
Reunión:
Congreso; . LVI Reunión Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011
Resumen:
Previamente
hallamos disminución del receptor c-mpl y de NF-E2 en pacientes con
Trombocitopenia Hereditaria causada por mutación del factor de transcripción
RUNX1, comprobándose que ambos son blancos del RUNX1 en el MK. Para identificar
nuevos reguladores de la producción plaquetaria entre los genes regulados por
RUNX1, se inhibió la expresión del factor de transcripción ID1, el cual se
halló disminuido en estos pacientes y cuyo rol en la megacariocitopoyesis no ha
sido investigado. Se realizó silenciamiento de ID1 en progenitores CD34+ de
cordón umbilical mediante ARN de interferencia, evaluándose el efecto en la
megacariocito y trombopoyesis. Se efectuó transducción de CD34+ con
lentivirus conteniendo shRNA-ID1 obtenidos en células 293FT, con eficiencia 26%
en cultivos shRNA-ID1 y 21% en control. Una vez purificada esta población
mediante sorting de CD34+GFP+ 48hs post-transducción (pureza
95% y 92%, respectivamente), se cultivó con TPO. Se halló inhibición de la
diferenciación hacia MK (CD41+) de las CD34+ transducidas con shRNA-ID1
respecto al control, 64,1% vs 70,8% CD41+, y disminución de la maduración MK,
evidenciada por % MK maduros, 29,2% vs 41,6% CD41+CD42b+, y por la
fluorescencia (Gm) 42b, 41,3 vs 61,3. Contrario a lo observado en la
megacariocitopoyesis, no se halló inhibición de la trombopoyesis, número de
proplaquetas en cultivos shRNA-ID1 vs control, 16 vs 13. A pesar de las
diferencias fenotípicas halladas en las células tratadas con shRNA-ID1, no se
observó disminución del ARNm para ID1 mediante PCR en tiempo real, ΔCt
ID1-GAPDH 4,96 vs 4,90, por lo cual se evaluará si la inhibición de la
megacariocitopoyesis se debe a un efecto del shRNA en la traducción proteica de
ID1. En conclusión, considerando la dificultad existente en la transfección de
CD34+ y MK, esta metodología resultó adecuada para evaluar el efecto del
silenciamiento génico en MK primarios. La inhibición observada en la
megacariocitopoyesis sugeriría un posible rol de ID1 en este
proceso.