INVESTIGADORES
GOMEZ CASATI Diego Fabian
congresos y reuniones científicas
Título:
Nuevo tag de afinidad para la purificación de proteínas recombinantes: dominios de unión a almidón.
Autor/es:
WAYLLACE, N. Z.; VALDEZ, H.; DIEGO FABIAN GOMEZ CASATI; BUSI, M. V.
Lugar:
Rosario, Argentina
Reunión:
Congreso; VII Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO- Argentina - II Congreso Internacional de Biotecnología Vegetal.; 2009
Institución organizadora:
REDBIO
Resumen:
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La enzima almidón sintasa III (starch synthase III, SSIII) de Arabidopsis thaliana contiene en su
dominio N-terminal tres regiones repetitivas y cada una de ellas codifica para
un dominio de unión a almidón (SBD, starch
binding domain) perteneciente a la familia 21 de Módulos de Unión a
Carbohidratos (CBM, carbohydrtae binding modules). Los SBDs presentan como
ventaja biotecnológica respecto de los CBMs la presencia de dos sitios de unión
al polisacárido que les confieren mayor capacidad de unión. De los tres SBDs estudiados
(SDB1, SBD2 y SBD3), SBD2 mostró una constante de adsorción a almidón, a amilosa
y a amilopectina seis veces mayor que el valor obtenido para SBD1 y SBD3. Por
lo tanto, consideramos que SBD2 puede convertirse en un "tag de
afinidad" muy eficiente para la purificación de proteínas recombinantes en
un sólo paso cromatográfico, en columna o en solución acuosa, a través del uso
de resinas de amilosa disponibles comercialmente. Para ello, llevamos a cabo
columnas con la resina sepharosa amilosa y ensayamos la purificación de SBD2 utilizando
un gradiente de maltosa. Ensayos preliminares con proteínas mitocondriales de
interés para el laboratorio, fusionadas a SBD2, mostraron resultados similares
a los obtenidos con un tag de histidinas y resina de níquel.