EL COMPLEJO Gβγ PARTICIPA EN LA SEÑALIZACIÓN DE CRH EN CÉLULAS NEURONALES HIPOCAMPALES

PAULA AYELÉN DOS SANTOS CLARO; CAROLINA INDA; SERGIO SENIN; SUSANA SILBERSTEIN

Mar del Plata, Pcia de Buenos Aires, Argentina

Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

CRH ejerce un rol central en la respuesta neuroendócrina y comportamental al estrés, dirigiendo la activación del eje hipotálamohipófisis-adrenal y actuando como neuromodulador en el sistema nervioso central. Su desregulación se relaciona con desórdenes como ansiedad/depresión y enfermedad de Cushing. Nuestro objetivo es definir las vías de señalización de CRH por el receptor CRHR1 y los componentes involucrados, con potencial relevancia terapéutica en desórdenes ligados a estrés. CRHR1 es un GPCR cuya señalización involucra las vías del AMPc, las MAPKs y el calcio. La proteína G heterotrimérica acoplada a GPCRs está formada por las subunidades α, β y γ. Nos propusimos determinar si el complejo Gβγ está involucrado en la señalización de CRHR1 mediada por CRH. Utilizamos como modelo la línea celular neuronal hipocampal HT22, que expresa establemente el CRHR1 (HT22-CRHR1). Empleando un scavenger de Gβγ (sobreexpresión de la subunidad Gα de transducina) y un inhibidor farmacológico (galeína) analizamos la participación del complejo en las vías de señalización. Mediante sensores de FRET observamos que el bloqueo genético y farmacológico de Gβγ disminuyó significativamente la respuesta global de AMPc mediada por CRH (p< 0,05 respecto del control). El análisis por WB de las formas fosforiladas mostró que la activación de CREB, efector clásico de la vía de AMPc, y la de ERK1/2 se encontraron disminuidas en células en las que se bloqueó el complejo. Por RT-PCR exploramos la expresión de las adenilil ciclasas en células HT22-CRHR1. Detectamos tanto formas estimulables como inhibibles por Gβγ, lo que sugiere que la respuesta de AMPc proviene de un balance entre la contribución relativa de cada una de estas enzimas. Estos resultados indican que el complejo Gβγ participa en la señalización de CRH a través de CRHR1 en el contexto neuronal hipocampal y contribuyen a definir los mecanismos implicados a nivel central. Apoyado por ANPCyT, CONICET, UBA y FOCEM (COF 03/11).