CAMBIOS EN LOS RESIDUOS AMINOACÍDICOS 222 Y 151 DE LA HEMAGLUTININA DE INFLUENZA A(H1N1)PDM09 ASOCIADOS A ENFERMEDAD SEVERA. ESTUDIO DE CEPAS ARGENTINAS IDENTIFICADAS EN EL PERÍODO 2012-2014

RUSSO MARA; PONTORIERO ANDREA; AVARO MARTIN; CZECH ANDREA; BENEDETTI ESTEFANIA; CAMPOS A; PERIOLO NATALIA,; BAUMEISTER, E

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología II Congreso Latinoamericano de Virología IV Simposio de Virología Clínica II Simposio de Virología Veterinaria ?Dr. José L. La Torre?; 2015

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción: Los receptores (R) de ácido siálico (AS) en la célula huésped, se encuentran unidos a galactosa (Gal) por uniones alpha 2,6 o 2,3. Los R de AS alpha -2,6 Gal se encuentran mayormente en la mucosa nasal, faringe, traquea y bronquios, mientras que los alpha-2,3 Gal, se restringen a células de los bronquiolos y alvéolos pulmonares. Normalmente los virus de influenza que se transmiten eficientemente entre humanos reconocen R con unión alpha-2,6. Se ha encontrado que la mutación D222G, ubicada en el dominio de unión al R en la hemaglutinina viral (HA), permite el reconocimiento de los R alpha-2,6 Gal y alpha-2,3 Gal. La mutación A151T facilita la unión a R alpha-2,6 Gal, los más abundantes en el árbol respiratorio humano. Estos dos cambios se han observado en virus recuperados de pacientes con enfermedad grave.Objetivo: Detectar por pirosecuenciación presencia de cuasi-especies de virus influenza A(H1N1)pdm09 para los residuos aminoacídicos 222 y 151 de la HA, recuperados de pacientes graves y con enfermedadmoderada. Identificar los cambios D222G y A151T mediante secuenciación por el método de Sanger. Materiales y métodos: Se estudiaron 142 muestras de secreciones respiratorias para la mutación D222G/E/N, 34 del año 2012, 103 del 2013 y 5 del 2014, de las cuales 101 correspondieron a pacientes ambulatorios y 41 internados con diferentes condiciones particulares: inmunosuprimidos, embarazadas, diabéticos, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma y obesidad. Cinco muestras pertenecían a pacientes fallecidos. Para la mutación A151T/V se estudiaron las mismas muestras de pacientes internados que para la mutación anterior y 54 de las de pacientes ambulatorios. Se extrajo el RNA de las muestras a estudiar utilizando columnas de sílica comerciales. Se llevó a cabo la técnica de RT-PCR seguida de pirosecuenciación de la región que abarca la posición 222 y 151 de cepas A(H1N1)pdm09 en la HA viral. Se utilizaron pares de primers específicos, con uno de ellos biotinilado y un primer interno para la reacción de pirosecuencia de cada residuo. Además se analizaron 19 secuencias convencionales de 2013 y 13 de 2013. Resultados: Se pudieron caracterizar por pirosecuenciación 137 muestras para la mutación D222G/E/N y 46 para el cambio A151T/V. En todos los casos las secuencias obtenidas resultaron ser wild type. De la misma manera las 32 muestras analizadas por secuenciación convencional resultaron ser wild type. Conclusiones: Las cepas analizadas durante el período 2012-2014 no mostraron cambios que confieren mayor afinidad a R a alpha-2,3 Gal ni de facilitación del reconocimiento de R a alpha-2,6 Gal. Otros factores deberían considerarse para explicar causas de severidad de los casos graves y fatales. Es importante continuar con la vigilancia de estos cambios aminoacídicos en nuestro país, sobre todo en casos fatales o severos, teniendo en cuenta el incremento del número de cepas con estas mutaciones observado a nivel mundial.