Alteración en la funcionalidad de los megacariocitos mediada por los auto-anticuerpos plasmáticos presentes en la Trombocitopenia Inmune Primaria.

GRODZIELSKI M; DI BUONO C; GOETTE NP; GURINI E; LEV PR; PIERDOMINICI M; MOLINAS FC; HELLER PG; BALDUINI A; MARTA RF

Mar del Plata

Congreso; XXII Congreso Argentino de Hematología; 2015

Sociedad Argentina de Hematologia

En un estudio previo demostramos que el plasma de pacientes con trombocitopenia immune primaria (PTI) que presentan anticuerpos contra la integrina αIIbβ3, inhibe la formación de proplaquetas in vitro. Por otra parte, los plasmas de PTI con anticuerpos contra la integrina αIIβ1 interfirieron con la normal inhibición de la formación de proplaquetas producida por el colágeno tipo I.ObjetivosDeterminar si existen anormalidades en la adhesión y el spreading de megacariocitos normales a matrices de fibrinógeno y colágeno tipo I, en presencia de plasmas conteniendo anticuerpos dirigidos contra las integrinas αIIbβ3 y αIIβ1, respectivamente.Material y métodosSe obtuvieron megacariocitos normales por cultivo durante 13 días de progenitores hematopoyéticos CD34+ de sangre de cordón umbilical. Dichas células se incubaron durante 16 horas con plasmas de pacientes con PTI o controles (10% v/v) sobre cubreobjetos tapizados con fibrinógeno o colágeno I, dependiendo del auto-anticuerpo presente en el plasma patológico a evaluar. Pasado el tiempo de incubación, se contó el número de megacariocitos no adheridos y se calculó la cantidad de células adheridas por sustracción a las células totales sembradas. Además, las células adheridas se fijaron y marcaron con anti-CD61-FITC para determinar el porcentaje de células en spreading por microscopía de epi-fluorescencia. Los experimentos se duplicaron en cultivos independientes.ResultadosLos plasmas de PTI conteniendo anticuerpos contra el complejo αIIbβ3 (n=6) indujeron una reducción del porcentaje de megacariocitos adheridos a fibrinógeno (test t, p= 0,008), así como de células en spreading (test t, p=0,0027). Por otra parte, los plasmas conteniendo anticuerpos contra la integrina αIIβ1 (n=2), indujeron una reducción del porcentaje de megacariocitos adheridos a una matriz de colágeno tipo I, así como de células en spreading (tabla). Aunque los valores obtenidos en presencia del plasma de estos últimos pacientes estuvo por debajo del rango normal (media±DS de los controles), no se observó diferencias estadísticamente significativas respecto a los controles dado el bajo número de muestras analizadas.ConclusionesEstos resultados sugieren fuertemente que la unión de los auto-anticuerpos a sus respectivos receptores en la membrana del megacariocito, interfiere con la correcta unión/señalización de los ligandos naturales, ocasionando una alteración en la funcionalidad de estas células. Esta anormalidad podría ser uno de los factores que contribuyen a la trombocitopenia en la PTI.Tabla adjuntaMatrizMuestraNAdhesión (%)PSpreading (%)PFibrinógenoControles677.4±3.40.00840.6±10.20.003Pacientes (anti αIIbβ3)643.4±19.219.3±12.3Colágeno IControles491.7±1.80.13327.1±2.00.2Pacientes (anti αIIβ1)283.8±4.413.4±0.4