Una mayor capacidad proliferativa y menor inducción de especies reactivas de oxigeno protegen de la fibrosis hepática a ratones knockout para SPARC (Secreted Protein, Acidic and Rich in Cysteine)

PEIXOTO E; ATORRASAGASTI C; REAL A; RODRIGUEZ M; MALVICINI M; GARCIA MG; FIORE E; CORRALES F; MAZZOLINI M

Mar del plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2015

SPARC es una glicoproteína matricelular involucrada en diversos procesos biológicos, entre los que se encuentra la fibrogénesis hepática. Hemos demostrado previamente en un modelo de fibrosis hepatica avanzada inducido por tioacetamida (TAA) que la ausencia de SPARC tiene un rol protector en la generación de fibrosis. Con el fin de estudiar los mecanismos involucrados en la protección de la fibrosis en ausencia de SPARC se realizó un análisis de los cambios de la expresión génica utilizando la plataforma de microarrays y de la expresión de proteínas utilizando 2D-DIGE sobre muestras hepáticas provenientes de ratones SPARC+/+ y SPARC-/- tratados 10 semanas con TAA. Para confirmar los resultados obtenidos se realizaron ensayos de immunohistoquímica y qPCR para PCNA a 24 horas de tratamiento con TAA. Asimismo, se obtuvieron cultivos primarios de hepatocitos provenientes de ratones SPARC+/+ y SPARC-/- y se evaluaron los niveles de especies reactivas del oxígeno (ROS) utilizando dichlorofluoresceina (DCFH) tanto en citometria como así también con microscopia de fluorescencia a las 3 horas de la administración de TAA. El análisis proteómico mostro un aumento de proteínas involucradas con la detoxificación de especies reactivas del oxígeno (catalasa, peroxirredoxina-1 y glutation-S-Transferasa P1 y Mu1) en los ratones SPARC-/- tratados con TAA, mientras que el estudio genómico mostro que a las 10 semanas luego de tratamiento con TAA los ratones SPARC-/- presentaban un incremento en la expresión de genes relacionados con la reparación de ADN y la proliferación celular. Los ratones SPARC-/- mostraron un incremento significativo de PCNA a las 24 horas tanto en los niveles de expresión génica como de proteínas. Asimismo, los niveles de especies reactivas del oxigeno fueron menores en los hepatocitos provenientes de ratones SPARC-/- que en los SPARC+/+ tratados con TAA. La ausencia de SPARC tiene un rol protector ante un estímulo fibrogénico como la TAA. Esta protección podría deberse, al menos en parte, a una mayor capacidad proliferativa de los hepatocitos y a una menor inducción de especies reactivas del oxígeno.