ESTUDIO DE LAS PROTEINAS ADAPTADORAS AP-2 EN EVENTOS DE EXCITOTOXICIDAD

TRONCOSO M; ASENSIO J; SELTZER A; SOSA M

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

La endocitosis mediada por vesículas cubiertascon clatrina (CCV) es un proceso crucial en el SNC,  para el mantenimiento de la integridadneuronal. Además de clatrina, la cubierta de las vesículas tiene proteínasadaptadoras (APs).  AP2 es un heterotetrámero formadopor subunidades a, β2, μ2 y d2. En el tejido nervioso se han descrito dos isotipos de a, a1 y a2,  y su co-existenciaaún no ha sido explicada. El complejo AP-2 reconoce secuencias específicasdel dominio citoplasmático de receptores, entre ellos los GABAAr  y NMDAr, . Objetivos: propusimos estudiar el comportamiento de ambassubunidades a en neuronas, en modelos animales o en líneas celulares, sometidos adiferentes condiciones de excitotoxicidad. Materialesy métodos: Cultivos celulares:líneas celulares de neuronas estriatales; StHdhQ7 (normales) y StHdhQ111 (conextensión poliglutamina típica de la enfermedad de Huntington) , fuerontratadas con 250 uM de ácido quinolínico (AQ) durante 3 o 6 hs. Luego lascélulas fueron procesadas para estudios de IFI, o de inmunoblot, utilizando unanticuerpo anti-AP2. Animales:se realizó una lesión por hipoxia-isquemia (H/I) a ratas (Wistar ? Kyoto) de 7días de edad. El tejido cerebral seextrajo a los 5 días post-lesión y las membranas fueron utilizadas para losensayos ?binding?.  Para evaluar la presencia de proteínas?docking? para AP-2 en membranas de las células o de cerebro de ratas, serealizaron ensayos ?binding? con AP-2 obtenidas de cerebro bovino. Resultados: En células: se observaron(por IFI y WB) diferencias en la expresión de AP-2 entre ambas líneascelulares, siendo menor en las Q111, pero con una distribución perinuclear queco-localiza con golgina. El tratamiento con AQ indujo cambios en ambas líneascelulares; con una redistribución dispersa, pérdida de co-localización congolgina y un aparente aumento de la expresión en las Q111. En animales seobservó un aumento de AP-2 en la cx de H/I en el lado contralateral, y unatendencia similar en el hipocampo. En los ensayos ?binding? se observó que lasubunidad  α1 tiene afinidad pormembranas, la cual es menor en la Cx de los animales H/I. Concluimos que lamaquinaria endocítica podría ser alterada por la excitotoxicidad.