Amplificación del promotor 1 de la fosfotirosina fosfatasa SHP-1 tratado con bisulfito.

GIORGIO EM, A DE LA ROSSA, BJ CHANETON, MA CUBILLA, MM TISCORNIA, MA LORENZATI, AE CARIAGA-MARTINEZ, PD ZAPATA.

Pergamino, Argentina

Congreso; 36º Congreso Argentino de Genética; 2007

SAG

La fosfotirosina fosfatasa SHP-1 es gen supresor de tumores que modula los efectos proliferativos de factores de crecimiento. Se expresa en tejido hematopoyético y epitelial, habiéndose demostrado su disminución o anulación en adenocarcinomas prostáticos. La expresión del gen shp-1 en tejido hematopoyético esta controlada mediante el Promotor 2 ubicado dentro del primer intrón, mientras que la expresión en tejido epitelial esta regulada mediante el Promotor 1 ubicado en posición 5?upstream del exón 1. Recientes estudios indican que los cambios de expresión observados podrían deberse a cambios en la metilación del promotor 1. El objetivo del trabajo es estandarizar los parámetros que permitan la amplificación del promotor 1 del gen shp-1 luego del tratamiento con bisulfito de sodio para analizar su patrón de metilación. Con este fin se extrajo ADN y se realizó el tratamiento con bisulfito de 9 muestras de sangre y mucosa yugal provenientes de personas sanas. Para la amplificación se diseñaron 4 cebadores específicos que hibridan en zonas libres de islas CG del promotor 1, abarcándolo por completo desde +10 hasta -1200. Para la amplificación se utilizo un esquema de ciclado con segmentos de Tm decrecientes y amplificación tipo "touchdown". Las bandas correspondientes a los tamaños esperados fueron cortadas, purificadas y clonadas en el promotor pGEM-T Easy para su análisis posterior. Esto permitirá establecer el patrón de metilación del promotor 1 relacionándolo con la expresión de PTPN6 en células hematopoyéticas y epiteliales, y posteriormente comparar este patrón con el que muestren las células epiteliales prostáticas normales y tumorales. shp-1 en tejido hematopoyético esta controlada mediante el Promotor 2 ubicado dentro del primer intrón, mientras que la expresión en tejido epitelial esta regulada mediante el Promotor 1 ubicado en posición 5?upstream del exón 1. Recientes estudios indican que los cambios de expresión observados podrían deberse a cambios en la metilación del promotor 1. El objetivo del trabajo es estandarizar los parámetros que permitan la amplificación del promotor 1 del gen shp-1 luego del tratamiento con bisulfito de sodio para analizar su patrón de metilación. Con este fin se extrajo ADN y se realizó el tratamiento con bisulfito de 9 muestras de sangre y mucosa yugal provenientes de personas sanas. Para la amplificación se diseñaron 4 cebadores específicos que hibridan en zonas libres de islas CG del promotor 1, abarcándolo por completo desde +10 hasta -1200. Para la amplificación se utilizo un esquema de ciclado con segmentos de Tm decrecientes y amplificación tipo "touchdown". Las bandas correspondientes a los tamaños esperados fueron cortadas, purificadas y clonadas en el promotor pGEM-T Easy para su análisis posterior. Esto permitirá establecer el patrón de metilación del promotor 1 relacionándolo con la expresión de PTPN6 en células hematopoyéticas y epiteliales, y posteriormente comparar este patrón con el que muestren las células epiteliales prostáticas normales y tumorales. shp-1 luego del tratamiento con bisulfito de sodio para analizar su patrón de metilación. Con este fin se extrajo ADN y se realizó el tratamiento con bisulfito de 9 muestras de sangre y mucosa yugal provenientes de personas sanas. Para la amplificación se diseñaron 4 cebadores específicos que hibridan en zonas libres de islas CG del promotor 1, abarcándolo por completo desde +10 hasta -1200. Para la amplificación se utilizo un esquema de ciclado con segmentos de Tm decrecientes y amplificación tipo "touchdown". Las bandas correspondientes a los tamaños esperados fueron cortadas, purificadas y clonadas en el promotor pGEM-T Easy para su análisis posterior. Esto permitirá establecer el patrón de metilación del promotor 1 relacionándolo con la expresión de PTPN6 en células hematopoyéticas y epiteliales, y posteriormente comparar este patrón con el que muestren las células epiteliales prostáticas normales y tumorales.