Estudios sobre amilasa en hepatopáncreas del cangrejo eurihalino Neohelice granulata

ASARO, A.; PAGGI; R.A.; DE CASTRO, R.E. ; LÓPEZ MAÑANES, A,A.

Encuentro; X Encuentro Biólogos En Red; 2015

Las amilasas tienen una importancia fisiológica central debido a su papel en la digestióniinnifcoiraml adceió ns ussotbrareto asm gilalicsoagsé ennic hoes patatolepsá nccormeaos daelm cidaónng reyj osg leuucórigheanlinoo. sS eins aeúmn beasrcgaos, a layfragmentaria. Nuestro objetivo fue determinar la presencia de diferentes formas, realizaruna purificación y caracterización parcial de amilasa en hepatopáncreas de N. granulata.Machos adultos se mantuvieron 10 días en 35? de salinidad. El sobrenadante (10000xg15 min) de homogenato de hepatopáncreas (Tris-HCl 50 mM, pH 8.0) (4 ml x g de tejido-1) se utilizó como fuente de enzima para: a) realizar un zimograma inicial, b) realizargpeulr ifeicna csioólnu cpióanrc diael. aZlimmiodgórna m(1a%: luwe/vg,o pdHe 6e.l0e,c t9ro0f omreins)is y e sne 1 t2iñ%ó ScDonS lPugAoGl.E E, ls ezi minocgurbaóm ealinicial mostró la existencia en hepatopáncreas de cinco formas de amilasa entre 26-36kDa con una de 29 kDa de mayor actividad. Para la purificación parcial, el sobrenadantese sometió a precipitación diferencial con (NH4)2SO4, y el dializado correspondiente secargó en columna FPLC. Las fracciones obtenidas con mayor actividad de amilasa sejuntaron (pool B) y se realizó un zimograma y determinación de parámetros cinéticos parala hidrólisis de almidón y glucógeno. El zimograma mostró que el pool B contuvoprincipalmente la forma con mayor actividad (29 kDa). Se estudió el efecto de distintasconcentraciones de almidón o glucógeno (0.15-15 mg ml-1) en buffer fosfato 50 mM (pH5M.i2c)h aal e3li0sº-CM esnotberne (lAa lmacidtióvnid:a Kd mc=o rr1e.s2p4o nmdgie.mntle-1 ;a lG pluocoól gBe.n Eos: taK mfr=a c1c6ió.n1 9e xmhgib.miól -c1i)n.é Ltiocasresultados muestran la existencia de varias formas de amilasa en hepatopáncreas deN.granulata y sugieren la capacidad de N. granulata para la degradación inicial desustratos glucogénicos de diferentes fuentes.Trabajo Inédito