La TRH induce la expresión de TGFβ y colágenos I y III en la línea celular de fibroblastos NIH 3T3: posible mediadora del efecto fibrótico de AII

PERES DIAZ, LUDMILA; AISICOVICH, MAIA; LANDA, MARIA SILVINA; SCHUMAN, MARIANO LUIS; GARCIA, SILVIA INES

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

La TRH induce la expresión de TGFβ y colágenos I y III enla línea celular de fibroblastos NIH 3T3: posible mediadora del efectofibrótico de AII.Ludmila Peres Diaz, MaiaAisicovich,  María Silvina Landa, MarianoSchuman y Silvia I García. Laboratorio de Cardiología Molecular, Instituto deInvestigaciones Médicas A. Lanari, UE IDIM-CONICET.Con experimentos ?invivo? demostramos que la TRH cardíaca (TRHc) participa de los procesos desencadenantesde la hipertrofia cardiaca como la hipertrofia, la apoptosis y marcadamente enla fibrosis (Schuman y col 2011;2014). Hipotetizamos que la TRH debía actuardirectamente sobre los fibroblastos cardíacos. Estas células poseen receptorespara el tripeptido y son responsables de la fibrosis a través de la expresiónde colágenos y la consecuente expansión de la MEC. Como aproximación utilizamosla línea celular de fibroblastos de ratón NIH3T3. Luego de 24 hs sin suero, elcultivo se estimuló con TRH (1 y 10 uM) durante 24 y 48 h, tiempo en los cualesun grupo de placas (n=8) se levantaron para extraer el RNA y cuantificar genes(TGFβ, col I y III, MMP 9y3) por PCR en tiempo real (syber green como fluoróforointercalante). En otro grupo de placas (n=4) se cuantificaron  las proteínas por inmunofluorescencia. Tambiénevaluamos el tamaño celular en las distintas condiciones. Observamos un aumentosignificativo de la expresión de TGFβ en ambas concentraciones de TRH a las 24h (P<0.02) que se vio reflejado en una aumento de la proteína (p<0.03).Enigual sentido colágeno I y III mostraron una aumento significativo (p< 0.01)en mRNA  y proteína que concuerda con losresultados de TGFβ. Así también observamos un aumento (p< 0.02) del área celularde los fibroblastos estimulados con TRH a ambos tiempos. Decidimos estudiar siTRH es mediador del efecto fibrótico de AII que se sabe esta mediadoprincipalmente por TGFβ. Estimulamos los cultivos por 24h con AII 1uM con y sinbloqueo previo de TRH (lipofectamina+siRNA) y observamos que AII induce elaumento de TRH (p<0.04) y que su bloqueo atenúa el marcado aumento de TGFβ yde la expresión de colágenos inducido por AII. Nuestros resultados muestran porprimera vez que la TRH actúa sobre los fibroblastos estimulando la expansión dela MEC (TGFβ, colágenos, etc.) y que su presencia es requerida para el efectofibrótico de la AII.