Análisis de la genotoxicidad de compuestos aislados de hojas de Tripodanthus acutifolius.

SOBERON, J. R.; SGARIGLIA, M. A.; SAMPIETRO, D. A.; QUIROGA, E. N.; VATTUONE, M. A.

Tafí del Valle (Tucumán)

Congreso; XXV Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2008

Asociación de Biología de Tucumán

Introduccion: la genotoxicidad es la toxicidad que se manifiesta en el material qenetico de las celulas, e incluye efectos tanto directos como indirectos sobre el ADN. Los extractos vegetales crudos constituyen una mezcla compleja de compuestos con significativas actividades biológicas (antibacteriana, antioxidante, antiinflamatoria, etc.), pero con posibles efectos genotoxicos. La purificaci6n de compuestos bioactivos puede conducir a una disminucion de la toxicidad genetica, Objetivos: evaluar la actividad genot6xica de extractos obtenidos a partir de la infusion de Tripodanthus acutifolius (Ruiz & Pav6n) Van Thiegem (Loranthaeae) y de los compuestos purificados mediante el "ensayo rec" con cepas de Bacillus subtilis.  Materiales y metodos: se prepar6 una infusion a partir de hojas de T. acutifolius, acorde a Farmacopea Argentina Via Ed. EI extracto seco se extrajo con solventes de polaridad creciente (hexano, eter etiiico, acetato de etilo , metanol). EI extracto metan6lico se fracciono por cromatografia en columna (fase estacionaria: Sephadex LH-20, fase m6vil: metanol), y los eluentes se agruparon en 10 fracciones (L1-L10) de acuerdo a sus composiciones (reveladas con reactivo de productos naturales y con vainillin/H2S04) . Las fracciones se purificaron por HPLC en fase reversa, generando 4-(3 ´,4·-dihidroxifenil)-2-13-0-R-glucofuranosilbutano  tripodanthusido, a partir de L2), rutina y nicotiflorina (a partir de L4) e hiperosido e isoquercitrina (a partir de L8). Los compuestos se identificaron por tecnicas espectroscopicas (UV-Vis, RNM mono y bidimensional y polarimetria) y cromatoqraficas (coinyeccion con estandares en HPLC, cromatografla en papel para los azucares). La genotoxicidad se determino mediante el ensayo rec que evalua el crecimiento diferencial de cepas de B. subtilis H17 y M45 como indice de genotoxicidad. En los pocillos de policubetas se incubaron (a 37°C) las suspensiones bacterianas con cantidades crecientes de las muestras a evaluar, hasta que las D0595nm de los controles de crecimiento alcanzaron 0,1. Se calculo el porcentaje de crecimiento (Crecimiento %) para cada pocillo, y se grafico Crecimiento % en funcion de la concentracion de muestra ensayada (para cada cepa bacteriana). Las curvas se linealizaron (transformaci6n Probit), se calculo el area entre ambas curvas (S-probit, que representa la genotoxicidad) y los valores obtenidos se compararon con datos tabulados que indican el grade de genotoxicidad. Las pruebas se lIevaron a cabo por triplicado para cada concentraci6n de muestra y cada cepa. Se utilizaron K2Cr207 (referente genotoxico) y Kanamicina (referente no genotoxico). Resultados: la infusion de hojas de T. acutifolius y el extracto metan61ico presentaron fuerte genotoxicidad mediante el ensayo rec (S-Probit: 0,8 y 0,6 respectivamente). La fraccion L2 presento menor genotoxicidad (S-Probit: 0,3) . Los compuestos purificados no presentaron genotoxicidad al ser analizados individualmente (los valores de S-Probit fueron inferiores a 0,2). Conclusiones: los extractos crudos 0 parcial mente purificados pueden presentar toxicidades aditivas o slnergicas entre sus constituyentes. La purificacion de las sustancias que los componen permite por un lado comprender la naturaleza de los efectos biologicos y por otro lado disminuir la toxicidad.