Análisis de la expresión de un gen de clorofilasa en brassica oleracea bajo distintos tratamientos físicos y hormonales.

BÜCHERT A; CIVELLO PM; MARTÍNEZ GA

Rosario, Argentina

Congreso; XXVII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2008

SAFV

La enzima clorofilasa, encontrada en plantas superiores y algas, cataliza la hidrólisis de la molécula de clorofila en clorofílido y fitol. Este es considerado como el primer paso de la vía de degradación de clorofilas curante la senescencia foliar y la maduración de frutos. En el presente trabajo se diseñaron primers específicos para la secuencia de clorofilasa 1 (BoCLHI) de brócoli (Brassica olerácea) obtenidas de bases de datos (GenBank) y se obtuvo un fragmento específico de 169 pb, el cual se utilizó como sonda para Northern Blot. Se cosecharon cabezas de brócoli y se realizaron tratamientos físicos y hormonales. Como tratamientos hormonales, se evaluó el efecto de una citoquinina (6-BAP) y del etileno. Como tratamientos físicos se determinó el efecto de una incubación a 48 °C por 3 horas, tratamiento con luz UV-C (10 kJ/m2) y el uso de atmósferas modificadas. Las cabezas de brócoli tratadas y los controles fueron colocadas en oscuridad por 5 días para inducir la senescencia, y se tomaron muestras en los días 0, 3, 4 y 5. Se tomaron medidas de color superficial como seguimiento de la senescencia. Se extrajo ARN de las cabezas de brócoli para analizar su expresión mediante hibridación con la sonda de clorofilasa marcada con 32P. Se observaron diferencias en la expresión del gen BoCLHI en las cabezas de brócoli expuestas a luz UV-C, así como con las tratadas con 6-BAP. Asimismo se comparó ARN obtenido de diferentes secciones de la cabeza de brocoli y de hojas, tanto senescentes como presenescentes. En este caso se observó una mayor expresión en las inflorescencias, y se determinó una expresión considerablemente mayor en tejido foliar, en comparación con las inflorescencias. Sin embargo, las pocas diferencias observadas entre los diferentes tratamientos, indicarían la posibilidad de que BoCLHI sea una clorofilasa de expresión constitutiva.