L-ARABINOSE ISOMERASE DE Enterococcus faecium: EXPRESSÃO, OBTENÇÃO E PURIFICAÇÃO

DE SOUSA, MARYLANE; MANZO, RICARDO M.; MAMMARELLA, ENRIQUE J.; GARCÍA LÓPEZ, JOSE LUIS; PESSELA JOAO, BENEVIDES C.C.; ROCHA BARRO GONÇALVES, LUCIANA

Fortaleza

Simposio; XX Simposio Nacional de Bioprocesos (SINAFERM) y XI Simposio de Hidrólisis Enzimática de Biomasa (SHEB); 2015

Associação Brasileira de Engenharia Química (ABEQ)

O objetivo do presente trabalho é a fermentação e obtenção de extratos enriquecidos em L-arabinose isomerase (L-AI), para isomerização de D-galactose em D-tagatose, um substituto do açúcar em alimentos. O gene que codifica a (L-AI) de Enterococcus faecium foi clonado e expresso em Escherichia coli DH10B e BL21, utilizando dois diferentes plasmídeos comerciais PET29a e pBAD. O plasmídeo pET29a conferiu à proteína de interesse a fusão de uma cauda de seis histidinas na extremidade do C-terminal, enquanto o plasmídeo pBAD foi construído com uma sequência de seis histidinas localizadas na região do N-terminal, favorecendo nos ensaios de purificação. Ensaios de expressão foram estudados visando o aumento da concentração da enzima (L-AI), utilizando-se como meio de cultivo o LB (Luria-Bertani). A proteína recombinante produzida foi purificada com sucesso, em um único passo, por cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados (Immobilized Metal-Ion Affinity Chromatography ? IMAC).