"Actividades de fosfatasa alcalina en músculo de Chasmagnathus granulatus de la laguna de Mar Chiquita (Pcia. de Buenos Aires)"

PINONI, S.; LOPEZ MAÑANES, A.A.

Rosario

Congreso; VI Congreso, XXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2004

Sociedad de Biología de Rosario

Trabajos previos en nuestro laboratorio demostraron la existencia, en músculo de la quela del cangrejo eurihalino C. granulatus de la laguna de Mar Chiquita, de actividades de fosfatasa alcalina (AP). Previamente, demostramos en Cyrtograpsus angulatus, la otra especie de cangrejo dominante en la laguna, la existencia en músculo de la quela de actividad de AP posiblemente involucrada en mecanismos de ajuste secundarios a la osmoionorregulación. El objetivo del presente trabajo fue continuar la caracterización de la actividad de AP en músculo de C. granulatus como paso preliminar para determinar el rol fisiológico de esta actividad. Machos adultos se aclimataron 30 días a 35‰ de salinidad. Se utilizaron homogenatos de músculo de la quela (Sacarosa 0,25 M/EGTA-Tris 0,5 mM, pH 7,4). La actividad se determinó colorimétricamente midiendo la hidrólisis de pNPP (9,5 ,mM) en presencia de HCl-Tris 100 mM (pHs 7,2 a 9,0) en de presencia  MgSO4 4 mM. Se realizaron 3 experimentos independientes. Los resultados del efecto de distintas concentraciones de pNPP y levamisol se analizaron por análisis de regresión no lineal (GraphPad Prism 2.01). Efecto de pH: La actividad total de AP (µmoles pNPxmin-1xmg prot-1) fue similar (2,39±0,05) entre pH 7,2 a 8,0. La actividad disminuyó un 67% a pH 9,0. Efecto de levamiso 16 mM: A pH 7,4 y 8,0 se detectó actividad de AP sensible (34,1 y 36,0 %, respectivamente) e insensible (65,9 y 64,0 &, respectivamente) al inhibidor específico de AP de otros tejidos (levamisol). La actividad sensible a levamisol fue inhibida en una forma dependiente de la dosis (2-16 mM) con una Ki de 8,5 y 6,0 mM a pH 7,4 y 8,0, respectivamente). Efecto de pNPP (2-13 mM): Las actividades sensible (Km=0,65 y 1,70 mM, Vmax=0,51 a pH 7,4 y 8,0) e insensible (Km=1,35 y 0,73 mM, Vmax=0,72 y 0,80 a pH 7,4 y 8,0, respectivamente) a levamisol exhibieron una cinética michaeliana. Los resultados muestran la existencia en  músculo de la quela de C. granulatus de actividad de AP sensible e insensible a levamisol sugiriendo la posible existencia de distintas isoenzimas en músculo de este cangrejo. La posible participación diferencial de estas actividades de AP en procesos de ajuste relacionados a respuestas osmoionorregulatorias de C. granulatus  requiere mayor investigación.