CONCORDANCIA ENTRE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA Y WESTERN BLOT PARA EL DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE TOXOPLASMOSIS EN CERDOS.

PARDINI L.; BACIGALUPE D.; LARSEN A.; MORÉ G.; PIÑEYRO P.; VENTURINI L; VENTURINI M.C.

Santa Fe

Congreso; XVII Reunión Científica Técnica AAVLD; 2008

Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorio de Diagnóstico

Introducción Toxoplasma gondii es un protozoo Apicomplexa que afecta a animales domésticos y silvestres. En el  cerdo la toxoplasmosis se presenta generalmente en forma subclínica si bien puede ocasionar pérdidas reproductivas. La prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) es ampliamente utilizada para el diagnóstico de toxoplasmosis en diferentes especies. En un estudio previo sobre cerdos provenientes de granjas intensivas a campo y en confinamiento se estimó por  IFI una prevalencia de 93% y 31% respectivamente. El  consumo de carne de cerdo mal cocida es una importante fuente de infección para el hombre, por lo que es necesario desarrollar técnicas de diagnóstico con conocida  sensiblilidad  y especificidad. El objetivo de este estudio  fue establecer la concordancia entre la IFI y el  western blot (WB), como prueba confirmatoria para el diagnóstico serológico de toxoplasmosis en cerdos. Materiales y métodos Se analizaron 195  sueros de cerdos de diferentes categorías positivos y negativos a IFI en proporción 1:3  respectivamente.  Para la prueba de IFI se realizaron diluciones a partir de 1:25 utilizando como antígeno taquizoítos de la cepa RH de T gondii  y un conjugado comercial anti-IgG de cerdo. Para el antígeno de WB se sonicaron  taquizoítos de T gondii, las proteínas se concentraron con acetona y luego se diluyeron con buffer de muestra, Tris-HCl 1M pH 6,8, Sodio Dodecil Sulfato (SDS), 2-mercaptoetanol, glicerina y azul de bromofenol (2mg/ml). Se colocaron  en Baño de María a 100ºC, 5 minutos. Posteriormente se separaron en  geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) al 12% usando un sistema de buffer discontinuo. Se transfirieron electroforéticamente a una membrana de PVDF (polyvinylidene difluoride) y se bloquearon con  leche descremada 5%, 0,2% de Tween 20 en PBS a 4ºC durante una noche. Las membranas se incubaron con los sueros diluídos 1:100 por 90minutos. Se incubaron con conjugado anti-IgG de cerdo marcado con peroxidasa por 90 minutos. Los lavados se realizaron con 0,5% PBS-Tween 20. La reacción se reveló utilizando agua oxigenada como sustrato en presencia de DAB como cromógeno. Se utilizó un marcador de peso molecular (18,28,37,52,93,106kDa). Se consideraron positivos los sueros capaces de reconocer la proteína P30 (4). Para evaluar la concordancia entre ambas pruebas se utilizó el programa Epidat 3.1 (95% de confianza). Resultados El 26,66% (52/195) de las muestras fueron positivas por ambas pruebas. El 10,25% (20/195)  de los sueros resultaron  negativos por IFI y positivos por WB. Se obtuvo un valor  de  Kappa  de 0.7554 (95% de confianza).  Discusión Se observó una muy buena concordancia entre ambas pruebas. El WB puede utilizarse como prueba confirmatoria para el diagnóstico de toxoplasmosis en cerdos en nuestro medio. La detección de anticuerpos por ambas pruebas fue  útil para seleccionar este  grupo de sueros como “gold estándar” para evaluar otras pruebas. Discusión Se observó una muy buena concordancia entre ambas pruebas. El WB puede utilizarse como prueba confirmatoria para el diagnóstico de toxoplasmosis en cerdos en nuestro medio. La detección de anticuerpos por ambas pruebas fue  útil para seleccionar este  grupo de sueros como “gold estándar” para evaluar otras pruebas.