Caracterización del fenotipo MDR en células leucémicas humanas K562

YANINA ASSEF, FERNANDA RUBIO, GEORGINA COLÓ, SILVANA DEL MÓNACO, MÓNICA COSTAS Y BASILIO KOTSIAS.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La resistencia simultánea a diferentes agentes antineoplásicos, conocida como multidroga resistencia (MDR), se correlaciona con la sobreexpresión de P-glicoproteína (P-gp) en las células tumorales y es unas de las razones del fracaso de la quimioterapia. En el presente trabajo caracterizamos el fenotipo MDR en la línea celular leucémica humana K562 y su derivada resistente a vincristina (K-Vinc). La citotoxicidad a vincristina fue evaluada mediante el método de MTT siendo las IC50 de 0.5±0.5 y 400.6±219.8 µM para las células K562 y K-Vinc, respectivamente (p<0.01, n=8). La expresión de P-gp fue detectada por western blot como una banda a ~170 kDa, sólo en las células K-Vinc. Los estudios de funcionalidad de P-gp en términos de acumulación de la sonda Fluo-3 utilizando la citometría de flujo corroboraron estos resultados (p<0.01, n=3). Para evaluar si las células seleccionadas con vincristina son multidroga resistentes analizamos la viabilidad celular (con MTT) en presencia de drogas estructuralmente no relacionadas en ambos tipos celulares. Los índices de resistencia definidos como IC50 K-Vinc/IC50 K562 para imatinib, colchicina y doxorubicina fueron: 8.0±0.3, 44.8±8.8 y 2.8±0.4, respectivamente (n=5). Previamente, determinamos por EMSA que ambos tipos celulares presentaron actividad constitutiva de NF-κB, siendo menor en las células resistentes. Estudios preliminares muestran que el inhibidor de NF-κB, BAY 11-7082 (2,5 µM) incrementa la toxicidad al imatinib en las células K-Vinc pero no en K562. Las IC50 para imatinib e imatinib +BAY en K562 fueron 0.16±0.14 y 0.11±0.01 µM, respectivamente (p=0.25, n=7) y de 1.52±0.50 y 0.58±0.67µM, respectivamente, en K-Vinc (p<0.01, n=5). Nuestros resultados permiten concluir que las células K562 seleccionadas con vincristina  (K-Vinc) son multidroga resistentes. Además,el BAY 11-7082 incrementa la toxicidad al imatinib en estas células, que presentan una menor actividad constitutiva de NF-κB.