Terapia Fotodinámica basada en ALA. Tratamiento alternativo en células leucémicas.

DIEZ, BERENICE; GARCÍA, M; HAJOS, S.; BATLLE, ALCIRA; FUKUDA, HAYDÉE

Mar del Plata

Congreso; LII REUNIÓN ANUAL DE LA SAIC; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La terapia fotodinámica (TFD) basada en ácido 5-aminolevúlico (ALA) es útil para erradicar células malignas mediante la fotoactivación de porfirinas sintetizadas endogenamente a partir de su precursor biológico ALA. Para este trabajo se utilizaron líneas celulares obtenidas de una leucemia murina: LBR- (sensible a drogas antineoplásicas), LBR-D (resistente a doxorrubicina) y LBR-V (resistente a vincristina). Se midió la síntesis de porfirinas por extracción química a partir de ALA 0.1 mM durante distintos tiempos de incubación. La síntesis total aumenta en función del tiempo de incubación (resultados en pmoles porfirinas/106células: LBR-: 2 h: 6.9 ± 0.35; 3 h: 7.6 ± 0.6; 4 h: 10.2 ± 1.1; LBR-D: 3 h: 10.8 ± 0.8; 4 h: 13.8 ± 1.2; LBR-V: 3 h: 12.6 ± 1.6). La línea LBRV fue la que mayor cantidad de porfirinas sintetizó. Se evaluó también la cantidad de porfirinas retenidas intracelularmente y las que se externalizan al medio de incubación. A tiempos cortos de incubación (2-3 h) la proporción de porfirinas que se externaliza es mayor que la intracelular. A medida que aumenta el tiempo de incubación, ambos valores se equilibran (% extracelular: LBR-: 2 h: 71.74 ± 0.5; 3 h: 76.22 ± 6.24; 4 h: 57.05 ± 7.22; LBR-D: 3h: 64.22 ± 6.79; 4h: 55.36 ± 5.77; LBR-V: 3 h: 71.21 ± 7.21; 4 h: 50.87). Se evaluó la viabilidad celular (Tripan Blue) luego de la incubación con ALA y posterior iluminación (0.18 J/cm²). No se observaron diferencias significativas en la sensibilidad al tratamiento en las tres líneas estudiadas (% supervivencia 1 h post tratamiento: LBR-: 16.39; LBR-D: 14.03; LBR-V: 11.21; 18 h post tratamiento: LBR- 10.42). Luego de 18 h no se observó viabilidad en las líneas resistentes. Los resultados obtenidos hasta el momento constituyen una base sobre la cual continuar futuras investigaciones que permitan dilucidar los efectos de la TFD como posible tratamiento de leucemias.6células: LBR-: 2 h: 6.9 ± 0.35; 3 h: 7.6 ± 0.6; 4 h: 10.2 ± 1.1; LBR-D: 3 h: 10.8 ± 0.8; 4 h: 13.8 ± 1.2; LBR-V: 3 h: 12.6 ± 1.6). La línea LBRV fue la que mayor cantidad de porfirinas sintetizó. Se evaluó también la cantidad de porfirinas retenidas intracelularmente y las que se externalizan al medio de incubación. A tiempos cortos de incubación (2-3 h) la proporción de porfirinas que se externaliza es mayor que la intracelular. A medida que aumenta el tiempo de incubación, ambos valores se equilibran (% extracelular: LBR-: 2 h: 71.74 ± 0.5; 3 h: 76.22 ± 6.24; 4 h: 57.05 ± 7.22; LBR-D: 3h: 64.22 ± 6.79; 4h: 55.36 ± 5.77; LBR-V: 3 h: 71.21 ± 7.21; 4 h: 50.87). Se evaluó la viabilidad celular (Tripan Blue) luego de la incubación con ALA y posterior iluminación (0.18 J/cm²). No se observaron diferencias significativas en la sensibilidad al tratamiento en las tres líneas estudiadas (% supervivencia 1 h post tratamiento: LBR-: 16.39; LBR-D: 14.03; LBR-V: 11.21; 18 h post tratamiento: LBR- 10.42). Luego de 18 h no se observó viabilidad en las líneas resistentes. Los resultados obtenidos hasta el momento constituyen una base sobre la cual continuar futuras investigaciones que permitan dilucidar los efectos de la TFD como posible tratamiento de leucemias.