OBTENCIÓN DE UN ANTISUERO ESPECÍFICO PARA LA DETECCIÓN DE LA PROTEÍNA ESTRUCTURAL VP2 DEL VIRUS DE LA BURSITIS INFECCIOSA.

RICHETTA, MATÍAS; GOMEZ, EVANGELINA; LUCERO, MARÍA SOLEDAD; CALAMANTE, GABRIELA; BERINSTEIN, ANALÍA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virologia; 2015

Sociedad Argentina de Virología

La Bursitis Infecciosa es una patología que tiene gran impacto económico en la producción avícola. Su agente causal, el virus de la Bursitis Infecciosa (IBDV), ha sido ampliamente estudiado y caracterizado, determinándose que la proteína viral de cápside VP2 es el principal antígeno capaz de inducir una respuesta inmune humoral protectora. En nuestro laboratorio se desarrollan vacunas biotecnológicas contra IBDV, que poseen a la proteína VP2 como componente principal. En este contexto, es fundamental la disponibilidad de una herramienta molecular que permita detectar específicamente la presencia de la proteína VP2 expresada a partir de diversos sistemas. Previamente, en nuestro grupo se expresó y optimizó la purificación de la proteína VP2 recombinante (VP2r) en bacterias. El objetivo del presente trabajo fue obtener y evaluar la utilidad de un antisuero policlonal específico para la detección de la proteína VP2 de IBDV. Se partió de un cultivo bacteriano (500 ml) que se creció con agitación hasta alcanzar la fase de crecimiento exponencial (OD600 = 0,5), se indujo la expresión de VP2r por el agregado de IPTG (0,5 mM) y las bacterias se colectaron por centrifugación 1 hora post inducción. El total del pellet bacteriano se procesó usando el método optimizado. Brevemente, la purificación se realizó en dos etapas: 1) mediante columnas de afinidad con Ni-NTA agarosa (la proteína VP2r posee un tracto de seis histidinas en el extremo N-terminal) y, 2) electroforesis en PAGE-SDS y electroelución. El rendimiento total fue de 1,5 mg de proteína VP2r pura. Para la obtención del antisuero la proteína VP2r pura (0,5 mg/dosis) se formuló con adyuvante de Freund, se inmunizó intramuscularmente (día 0 y 21) un conejo y a distintos tiempos se realizaron sangrías exploratorias para detectar la presencia de anticuerpos específicos contra VP2r por Western blot. Además, para evaluar la utilidad del suero anti-VP2 se realizaron ensayos de Western blot contra extractos proteicos provenientes de plantas de tabaco agroinfiltradas (GV3101/pBINPLUS-VP2) y de cultivos celulares infectados con IBDV o con poxvirus recombinantes que expresan VP2. Luego de una o dos inmunizaciones fue posible detectar la presencia de anticuerpos específicos contra VP2r hasta diluciones del suero 1/800 y 1/8000, respectivamente. Además, el suero anti-VP2 permitió la detección específica de la proteína de interés a partir de sistemas de expresión utilizados en el desarrollo de vacunas biotecnológicas: plantas y poxvirus (MVA y FWPV) recombinantes. Finalmente, la proteína VP2 fue también detectada en el contexto de la infección de IBDV en cultivos celulares o en aves (en homogenatos de bolsa de Fabricio). En conclusión, se obtuvo un antisuero específico (de alto título) contra la proteína VP2 de IBDV que constituye una herramienta de suma utilidad para el trabajo en nuestro laboratorio y para la detección de IBDV en muestras biológicas.