INVESTIGADORES
GARCIA Maria Laura
congresos y reuniones científicas
Título:
Búsqueda de actividad supresora en el virus de la Psorosis de los cítricos: optimización de un sistema transitorio para la inducción y ruptura del PTGS
Autor/es:
EDUARDO J. PEÑA, CARINA A. REYES, MARÍA C. ZANEK, OSCAR GRAU, Y MARÍA L. GARCÍA
Lugar:
BUENOS AIRES
Reunión:
Congreso; BAIRESBIOTEC2005; 2005
Resumen:
La Psorosis de los cítricos es una
epidemia en Argentina y Uruguay. Su agente causal, Citrus psorosis virus (CPsV), esta
constituído por tres RNAs de simple cadena y polaridad negativa y es la especie
tipo de un nuevo género, Ophiovirus (Milne et al., 2003). El RNA1 posee dos marcos
de lectura, uno codifica para la polimerasa viral (280K), y otro más pequeño de
función desconocida (24K). El RNA 2 codifica una proteína (54K) cuya función se
desconoce y el RNA 3 codifica la proteína de cubierta (48K, CP).
En las plantas, el PTGS es un mecanismo
natural de defensa disparado contra agentes virales y otros ácidos nucleicos
extraños o patogénicos. De inducirse, los RNAs virales son degradados a
fragmentos de 21-23 nt llamados siRNAs (small
intereference RNAs) y la planta adquiere resistencia al virus.
Una estrategia
eficiente para disparar el PTGS es mediante construcciones capaces de expresar RNA
de doble cadena (dsRNA) considerado como un fuerte inductor del PTGS. Esto se
logra mediante vectores binarios que contienen parte de la secuencia del gen a
silenciar insertada en sentido y antisentido, separados por un intrón. De esta
manera, en la célula se sintetizan RNAs mensajeros que adoptan una estructura
tipo hairpin, (Wesley 2001). La
técnica se denomina ihpRNA (intron-spliced hairpin RNA).
Se han identificado proteínas virales
(denominadas supresoras del PTGS) que intervienen en diferentes pasos del PTGS, inhibiéndolo y
permitiendo que el virus se multiplique y disemine. Entre varias supresoras, una
de las más caracterizadas es la
HcPro de Tobaco etch
virus, capaz de romper o revertir el silenciamiento establecido.
Para iniciar el estudio
de la función supresora en CPsV hemos optimizado un sistema
de inducción transitoria del PTGS para el gen marcador uidA, que es co-infiltrado con una construcción que expresa la
proteína viral