INVESTIGADORES
LOMBARDO Daniel Marcelo
congresos y reuniones científicas
Título:
AISLAMIENTO Y CULTIVO PRIMARIO DE CÉLULAS LUTEALES Y DEL EPITELIO OVIDUCTAL DE LLAMA (Lama glama).
Autor/es:
MARURI, A.; LOMBARDO DM.; TRASORRAS, VL,; MIRAGAYA, MH.; AGUERO, A.
Lugar:
Facultad de Ciencias Veterinarias.Buenos Aires
Reunión:
Jornada; Segundas Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; 2010
Institución organizadora:
Instituto de Investigación y Tecnología en eproducción Animal
Resumen:
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El
objetivo del presente trabajo es comunicar el primer aislamiento y cultivo
primario de células luteales (CPCL) y el cultivo primario de células
oviductales de llama (CPCO). Los ovarios y oviductos fueron obtenidos mediante
una laparotomía por el flanco bajo anestesia general. Las muestras se colocaron
en solución PBS con antibióticos, se disecó el cuerpo lúteo y se eliminó el
tejido perioviductal. Se realizaron sucesivos lavados con PBS y se dispersaron
por tratamiento mecánico y enzimático (tripsina 0.25%). Las células epiteliales
del oviducto se obtuvieron mediante raspado desde el extremo útero-tubárico hacia el
extremo ovárico. Se realizó el recuento celular en cámara de Neubauer obteniendo
una viabilidad mayor al 90% con azul tripán. Se sembraron 309 células/mm² en medio DMEM/F12 con antibióticos y 10% SFB
y se incubaron a 38,5 °C
en una atmósfera con 5 % de CO2. Se reemplazó el medio de cultivo
cada 48 horas hasta su fijación con metanol alcanzada la confluencia (día 7/8).
A las 48 horas de incubación se observaron bajo el microscopio invertido
abundantes células adheridas agrupadas en clusters, estableciendo un íntimo
contacto entre sí y alcanzando el estado de confluencia a los 7 días de
crecimiento in vitro. Se capturaron imágenes en microscopio de campo claro
utilizando el software IM50 (Leica). En el CPCO se distinguen células de
aspecto epitelioide, sus núcleos son únicos, céntricos y ovalados aunque
también se observan esféricos en menor número. Predomina la eucromatina y
presentan grumos de heterocromatina uniformemente distribuidos. En el CPCL
abundan células de aspecto epitelial con escasas prolongaciones citoplasmáticas
de mayor tamaño que las células epiteliales oviductales. Los núcleos interfásicos
presentan cromatina laxa con grumos dispersos de heterocromatina, son de
ubicación central y de forma oval. El citoplasma vacuolado es indicativo de la
actividad esteroideogénica de las células luteales. Este modelo experimental
permitirá ahondar en la fisiología reproductiva y contribuirá a mejorar las
técnicas de reproducción asistida en los camélidos.