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REGULACIÓN DE LA APOPTOSIS SOBRE UNA LÍNEA ESTABLECIDA DE CÉLULAS DE GRANULOSA BOVINA (BGC-1) CON UN ANÁLOGO DE GNRH (ACETATO DE LEUPROLIDE). Carou MC., Revilla M, Lombardo DM. Histología y Embriología. Facultad de Cs. Veterinarias, UBA. E-Mail: mccarou@fvet.uba.ar Receptores de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRHr) se han identificado en células de granulosa ovárica (CG) y luteales. La activación de GnRHr en la CG conduce a la estimulación o inhibición de la función gonadal. Experiencias in vivo e in vitro de la regulación hormonal con agonistas de GnRH, demostraron en ovarios de ratas un incremento en la atresia folicular. Así también, se determinó que la administración in vivo de un análogo de GnRH (GnRH-a) incrementa la muerte celular por apoptosis en tejido ovárico y en CG. Estudios previos de nuestro laboratorio, identificaron un aumento significativo en la proporción de células BGC-1 apoptóticas inducidas durante 24 hs con 100 nM de Acetato de Leuprolide (LA) mediante técnicas de DAPI y TUNEL. A los efectos de corroborar y analizar de manera más específica estos resultados, el propósito del presente trabajo fue realizar un análisis citométrico de flujo (FACS) mediante la marcación de las BGC-1 con Anexina V y IP. Se analizaron tres dosis de LA (1, 10 y 100 nM), en presencia de 5% de suero fetal bovino durante 24 y 48 hs de incubación. Se realizaron tres experimentos para 24 Hs y dos para 48 Hs ambos por triplicado, analizando los resultados por ANOVA de dos vías y análisis de comparación de medias de Bonferroni. Para 100 nM y 48 hs de incubación con LA, se observó un aumento significativo en la apoptosis total de 74 % respecto del control (p= 0.04). Los incrementos en la apoptosis temprana fueron significativos a 10 y 100 nM de LA, con un aumento del 70 % para 100 nM y del 69.84 % para 10 nM respecto del control (p = 0.015). Para incubaciones de 24 hs y 100 nM de LA se observa un aumento significativo de la apoptosis temprana 68,8 % respecto del control (p= 0.018) siendo el incremento para la apoptosis total del 35.87 % (p= 0.0244). Estos resultados son confirmatorios de los observados por DAPI y TUNEL. Por otra parte, mediante FACS con Anexina V y IP se pudo confirmar y visualizar la dinámica temporal del proceso apoptotico con incubaciones mas prolongadas (48 hs) a dosis de 100 y 10 nM del inductor.

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