EXPRESIÓN DEL COACTIVADOR RAC3 EN CARCINOMA RENAL Y EFECTO ANTITUMORAL DE LA RAPAMICINA

GALARZA PE; ALVARADO CV; COLO GP; ALVAREZ CL; AGUIRRE CE; COSTAS MA

Rosario

Congreso; X Congreso Argentino de Trasplantes; 2007

Sociedad Argentina de Trasplante

El coactivador asociado a receptores nucleares-3 (RAC3) se encuentra sobre-expresado en tumores mamarios, de ovario y próstata contribuyendo al desarrollo tumoral vía el aumento de actividad de hormonas esteroideas, y recientemente también se ha hallado su sobre-expresión en otros tumores no dependientes de hormonas esteroideas como páncreas, hígado y colon. Hemos descripto que RAC3 es también coactivador del factor de transcripción NF-kB y activado por una gran variedad de estímulos incluyendo citoquinas como TNF-a Se observó que la rapamicina en algunas líneas celulares puede inhibir la proliferación y/o incrementar el efecto citotóxico de otros quimioterapéuticos inhibiendo la vía de mTOR. La rapamicina es usada como inmunosupresor en pacientes transplantados y podría tener un rol antitumoral.  Hemos demostrado que la sola sobre-expresión de RAC3 tiene un rol anti-apoptótico independiente de NF-kB y que involucra la vía AKT/mTOR.      La hipótesis de trabajo es que las mismas señales activadoras de factores que utilizan a RAC3 (como NF-kB) podrían participar del control de su expresión y la vía AKT/mTOR participaría de su acción anti-apoptótica.   OBJETIVOS: Estudiar el nivel de expresión del coactivador en biopsias de carcinoma renal en pacientes trasplantados. Determinar en células de riñón embrionario humano (HEK293) las posibles señales involucradas en la expresión y actividad de RAC3. Analizar si la sobre-expresión de RAC3 protege de la apoptosis en presencia de rapamicina y H2O2. MATERIALES: Para determinar si TNF-a es capaz de regular la expresión de RAC3, células HEK293 fueron estimuladas con 10 ng/ml de la citoquina por 24hs.  Para evaluar la participación de la vía mTOR en la acción anti-apoptótica de RAC3, se estudió la muerte celular inducida por H2O2 1,5 mM en células con alto nivel de RAC3 (transfectadas con vector de expresión constitutiva) y en células control (vector vacío) en presencia o ausencia de 100 a 800 nM de rapamicina. Con el objetivo de evaluar los niveles de expresión de RAC3 en muestras de riñón humano se utilizó la técnica de inmunohistoquímica sobre biopsias de cuatro pacientes con carcinoma de células renales . RESULTADOS: Mediante el estímulo con la citoquina TNF-a se observó un aumento significativo del 40±10 % de RAC3 respecto al basal.  Respecto de la cascada AKT/mTOR en la acción biológica de RAC3, observamos una disminución de su actividad protectora de apoptosis inducida por H2O2 de 82 ± 10,2 % a 29 ± 8,4 % (respecto al basal) en presencia de rapamicina 100nM. En cuanto a la expresión en las biopsias de pacientes con  carcinoma renal observamos que la localización de RAC3 es claramente nuclear y que estaría aumentada al menos en un 30% con respecto a la expresión de un riñón normal. La expresión de RAC3 podría ser regulada al menos por citoquinas inflamatorias, aumentando su expresión y este aumento podría estar vinculado al desarrollo de tumores renales entre otros. La rapamicina, como inhibidor de la cascada AKT/mTOR sería un tratamiento promisorio, dado que inhibe la acción pro-tumoral de RAC3.