IFN y TNF endógenos están involucrados en la activación por vía clásica de macrófagos de ratones C57BL/6 inmunizados con cruzipaína

GUIÑAZÚ N; PELLEGRINI A; CANO R; AOKI P; CARRERA EA; GEA S.

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología.; 2004

Previamente reportamos que esplenocitos de C57BL/6 inmunizados con cruzipaína (Cz) exhiben un perfil Th1 (Guiñazú et al, 2004) y Células Adherentes de Bazo (CAB) se activan por vía clásica frente a Cz. Con el propósito de profundizar en los mecanismos involucrados en esta vía se analizaron los niveles de nitritos por reacción de Griess, IFNg por ELISA, la tasa de infección y el efecto de la neutralización de IFNg/TNFa. CAB fueron obtenidas de ratones C57BL/6 de 8 semanas, normales, o 14 días post inmunización id con 3 dosis de 10ug/ratón de Cz (inmune) u OVA (control). CAB (2x106 cel/ml) fueron cultivadas con Cz (10 mg/ml) o mantenidas en medio por 24 hs y luego infectadas con tripomastigotes (1:2) por 36 hs adicionales. Se observó un incremento significativo en los niveles de oxido nítrico (ON) en sobrenadante de cultivo de cel. inmunes respecto de los controles estimuladas con Cz (16,9±2 vs 3±0,5 mM) o medio (9,9±1,1 vs 4,4±0,6 mM). Además, el nº de cel. infectadas/100 cel, así como el nº de parásitos/100 cel. fue significativamente menor en inmunes vs controles (9,4±3,5 vs 27,5±3,8; 10±4 vs 30,25±5,3 respectivamente). Considerando que citoquinas como TNFa e IFNg facilitan la activación clásica de macrófagos, se evaluaron los niveles de IFNg en el sobrenadante de cultivo al estimular con Cz, inmunes vs controles (5238±297 vs 1636±228 pg/ml). El compromiso de TNFa e IFNg  fue evaluado por neutralización con mAcs (10 mg/ml). El análisis de los niveles de ON demostró una disminución parcial del mismo por efecto de la neutralización de IFNg. Notablemente, neutralizando ambas citoquinas los niveles de ON descendieron  en inmunes de 41,9 a 4 y en controles de 5 a 3,4 uM. CAB normales no se activaron por vía clásica frente al estímulo con Cz in vitro. En conjunto los resultados sugieren que TNFa e IFNg inducidas por Cz condicionan la respuesta efectora de los macrófagos,  en una cepa de ratones resistente a la infección con T. cruzi, favoreciendo el control de la misma.