Actividad antioxidante en extractos parcialmente purificados de ritidoma de Caesalpinia paraguariensis (D PARODI) BURK

SGARIGLIA, M. A.; SOBERÓN, J. R.; SAMPIETRO, D. A.; QUIROGA, E. N.; VATTUONE, M. A.

Tafí del Valle - Tucumán - Argentina

Congreso; XXIV Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2007

Asociación de Biología de Tucumán

Introducción: el ritidoma de Caesalpinia paraguariensis (Guayacán) se emplea en medicina tradicional para curar heridas y úlceras varicosas, para "bajar" el colesterol y tratar dolencias articulares. En trabajos anteriores se demostró la actividad antioxidante (AO) de Infusión, Decocción y Tintura. Para seleccionar el extracto a purificar también se consideraron las pruebas de citotoxicidad (Brine-shrimp assay) y genotoxicidad (B. subtilis Rec assay) in vitro realizadas. Se escogió la infusión por presentar actividad antioxidante más potente y rápida, ser no citotóxica y no genotóxica a las concentraciones en que actúa como AO y además por ser la forma extractiva mas empleada popularmente de esta especie. Objetivo: conocer la naturaleza química de el/los compuesto/s responsable/s de la actividad AO en infusión de ritidoma de C. paraguariensis, mediante procesos de purificación y análisis biodirigidos. Materiales y Métodos: la actividad AO fue evidenciada por una técnica autográfica en Síllcagel, empleando DPPH (radical libre estable), los extractos se ensayaron luego de cada proceso de purificación. 1m Fraccionamiento: mediante lixiviación (técnica L, F.A. VI Ed.) de liofilizado de infusión, extrayéndose en forma secuencial con solventes de distinta polaridad (1° Éter, 2° Cloroformo, 3° Metanol). Los respectivos extractos secos se resuspendieron en metanol, separándose para su análisis las fracciones solubles (FE, FC y FM, respectivamente). 2° Fraccionamiento: por cromatografía en columna de FM en Sephadex LH-20 y Metanol como solvente de elución. Las fracciones colectadas se agruparon en 12 diferentes (F1-F12), según perfil de elución a 280 nm y análisis en TLC (Sílica/ Tolueno-Acetato de Etilo- Fórmico- Metanol, 4:3:1:2/ NP-PEG, UV ^J. La fracción F3 se analizó por HPLC, en un equipo Gilson con sistema de gradiente y detector UV-VIS diferencial. Para la separación se usó una columna /6-S/L C18 (Phenomenex, 5 i m, 250 x 4,6 mm). Los solventes empleados fueron: A, Ac. Fórmico 0,05 % en agua, y B, Ac. Fórmico 0,05 % en Metanol/Acetonitrilo (6:4); gradiente: 0-10 % B en 1 min, 10-90 % B en 31 min, 90-100 % B en 1 min y 100 % B durante 12 min; flujo: 0,7 ml/min, volumen de inyección: 20 //. El análisis se realizó a temperatura ambiente (20 °C) y la e de detección fue 350 nm. Las fracciones correspondientes a los picos eluídos fueron concentradas en Rotavap y luego analizadas por Autografía y TLC. Resultados: Los tres extractos provenientes del 1er fraccionamiento presentaron actividad AO (FM>FE »FC). Todas las fracciones provenientes de la segunda purificación fueron activas. F3, la fracción con actividad AO más extensa, se analizó por HPLC y se obtuvieron 10 fracciones correspondientes a los picos (p) 14, 15, 16, 18, 18.5, 19, 20, 22, 25 y 40 minutos. El análisis autográfico reveló que la actividad AO está localizada en p16, p18, p20, p22 y p25. De acuerdo al análisis por TLC y a datos bibliográficos, dicha actividad estaría asociada a flavonoles y/o flavonas. Conclusiones: la purificación y análisis biodirigidos realizados hasta el momento, nos permitieron aproximarnos al conocimiento de la naturaleza química de los compuestos con mayor actividad antioxidante. A partir de este punto de la investigación es necesario optimizar la metodología para lograr aislar estos compuestos, en cantidad tal que nos permita realizar análisis estructurales conducentes a la identificación.