Estudio funcional y de la regulación del transportador de prolina de Trypanosoma cruzi.

MARTÍNEZ SAYÉ M; REIGADA C; DI GIROLAMO F; MIRANDA MR; PEREIRA CA

Congreso; X Congreso de Protozoología y enfermedades parasitarias; 2014

En tripanosomátidos, la prolina es un aminoácido esencial dado que constituye una fuente de carbono y energía alternativa a la glucosa. Adicionalmente, en Trypanosoma cruzi se ha demostrado que la prolina confiere resistencia ante estrés osmótico y que sustenta la invasión celular en tripomastigotes metacíclicos y la progresión del ciclo intracelular en el pasaje de epimastigotes intracelulares a tripomastigotes. Asimismo se ha establecido que la acumulación de prolina libre intracelular constituye un mecanismo de resistencia a estrés oxidativo. En nuestro laboratorio hemos generado una cepa transgénica de T. cruzi que sobre-expresa el transportador de prolina Tc069 (pTREX-Tc069), y hemos demostrado, no sólo que transporta más prolina que la cepa control, sino que además una mayor tasa de transporte se traduce en mayores niveles intracelulares de prolina libre. También hemos evaluado la respuesta de estos parásitos ante situaciones de estrés oxidativo y su respuesta al tratamiento con las dos drogas tripanocidas disponibles, y hemos reportado que los parásitos Tc069 presentan mayores IC50s que los parásitos control. Actualmente estamos estudiando la regulación del transportador de prolina en los parásitos Tc069. Hemos observado que la tasa de transporte varía a lo largo del crecimiento del cultivo, presentando un pico de máxima velocidad al inicio de la fase logarítmica, y que luego decae a valores nulos al alcanzarse la fase estacionaria. Asimismo hemos evaluado la expresión de la proteína recombinante y su localización subcelular mediante un ?flag? durante todo el cultivo y, en concordancia con el transporte, hemos observado que también varían de manera similar al transporte. Estos resultados indicarían que el transporte de prolina se ve influenciado por el estado metabólico de los parásitos, y además, se estaría evidenciando una regulación proteica post-traduccional que llevaría a la degradación del transportador de prolina y no sólo a su inactivación.