EXOCITOSIS DEL IRP EN CELULAS CROMAFINES DE RATON: ACOPLAMIENTO CON LOS CANALES DE CA2+ TIPO P/Q

ALVAREZ YD; PEREZ BAY AE; IBAÑEZ LI; JAVIS SE; TEDFORD HW; ZAMPONI G; MARENGO F

Cordoba, Argentina

Congreso; XXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Neurociencias; 2007

Sociedad Argentina de Investigación en Neurociencias

EXOCITOSIS DEL IRP EN CELULAS CROMAFINES DE RATON: ACOPLAMIENTO CON LOS CANALES DE CA2+ TIPO P/Q . Yanina D.Alvarez*, Andrés E.Perez Bay*, Lorena I.Ibáñez*, Scott E.Javis#, H. W.Tedford # , Gerald Zamponi # y Fernando D.Marengo*. *LFBM. IFIByNE-CONICET.FCEyN.U.B.A. # University of Calgary. School of Medicine.Calgary.Canadá. En células cromafines de ratón, dentro del conjunto de vesículas preparadas para liberarse, se distingue una respuesta secretoria ante despolarizaciones de corta duración,  proveniente del “pool” inmediatamente liberable. Utilizando registros de cambios de capacitancia celular para cuantificar exocitosis, estimamos el tamaño de este “pool” entre Bmín=21±2fF y Bmáx=30±2fF mediante un protocolo de pulsos pareados de 10ms.  La entrada de Ca2+ a través de canales de calcio voltaje dependientes dispara la exocitosis. El “pool” inmediatamente liberable estaría conformado por vesículas acopladas espacialmente a éstos. Así, sería esperable que este “pool” fuera sensible a un buffer rápido de Ca2+, BAPTA(500μM) que a EGTA(500μM). Consistentemente, la aplicación del primero logró disminuirlo significativamente. Por otro lado, el pool de vesículas preparadas para liberarse  no mostró diferencias entre buffers. Bloqueando los subtipos R+P/Q (con SNX+agatoxina) el “pool” inmediatamente liberable se redujo un 70% y la densidad de corriente un 60%. El posterior agregado de nitrendipina eliminó totalmente la corriente sin afectar este “pool”, quedando una fracción remanente de aproximadamente 5fF. Éstos y otros resultados obtenidos en células KO de P/Q (agregando SNX y luego nitrendipina) sugieren que el “pool” inmediatamente liberable se asocia a la corriente P/Q y es insensible a L. El acoplamiento entre la liberación del “pool” inmediatamente liberable y los canales P/Q asentaría en la existencia de un sitio de interacción para proteínas de liberación (synprint) en los canales P/Q donde interactúan proteínas del complejo SNARE. En células transfectadas con synprint observamos una disminución del “pool” inmediatamente liberable posiblemente por la pérdida del acople.