Efecto del ATP extracelular en la señalizacion de calcio en HepG2.

M.V. ESPELT, R.M. PAGNI, D.E. PAFUNDO, P.J. SCHWARZBAUM.

BUENOS AIRES

Congreso; XXII CONGRESO LATINOAMERICANO Y 1RO IBEROAMERICANO DE CIENCIAS FISIOLÓGICAS.; 2006

Sociedad Argentina de Fisiologia

El ATP extracelular cumple un papel importante en la cascada de señalización celular. Distintos tipos celulares liberan el nucleótido al espacio extracelular como respuesta a una variedad de estímulos que incluyen hipoxia, deformación mecánica de la membrana plasmática, etc. En particular, en hepatocitos aislados en cultivo primario se demostró que la deformación mecánica de la membrana plasmática produce el aumento del calcio citosólico libre (Ca2+i) en las células vecinas por medio de la liberación de un factor al medio extracelular que sería ATP. El objetivo del presente trabajo es estudiar el efecto del ATP extracelular sobre la señalización de Ca2+i en la línea celular de hepatocitos humanos HepG2. Utilizando microscopía de fluorescencia observamos que al incubar las células con diferentes concentraciones de ATP, el porcentaje de células que muestran al menos un pico (“spike”) en la concentración de Ca2+i aumenta hiperbólicamente con una K0.5=3.8 uM (n=4). Además, en condiciones de reposo el 12±3 % de las células presentaron al menos un pico de Ca2+i mientras que luego de la agitación del medio extracelular lo hicieron el 21±4% (n=6, p<0.05). Finalmente, la medición contínua de ATP extracelular resultó en un nivel basal de ATP liberado de 15.1±6.95 nM/106 céls. (n=5). La agitación del medio extracelular elevó el nivel de ATP extracelular a un máximo de 144±65.44 nM/106 céls. (p<0.05) con caída exponencial y una k= 0.82 min-1 tendiendo a un valor final de 25.65 nM/106 céls. La actividad Ecto-ATPasica fue de 1.05 10-3 ± 5.66 10-4 nmol Pi/106 céls. min (n=4, 0.1 uM ATP). De los resultados expuestos se concluye que en la línea celular HepG2 el ATP extracelular modula la concentración de Ca2+i y los resultados sugieren que probablemente la agitación del medio extracelular produce una liberación de ATP que modifica la señalización del Ca2+i.