INVESTIGADORES
RODRIGUEZ Horacio Adolfo
congresos y reuniones científicas
Título:
Vitelogenina como biomarcador de contaminación por xenoestrógenos: producción y caracterización de un anticuerpo para detección de vitelogenina de yacaré overo (Caiman latirostris)
Autor/es:
REY F; RAMOS JG; STOKER C; RODRIGUEZ HA; BUSSMANN, L; LUQUE EH; MUÑOZ DE TORO M
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; 48º Reunión Anual SAIC / 51º Reunión Anual SAI; 2003
Institución organizadora:
SAIC: Sociedad Argentina de Investigación Clínica y SAI: Sociedad Argentina de Inmunología
Resumen:
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Los xenoestrógenos
pueden interferir con la homeostasis del sistema endocrino. Tanto la actividad
agroindustrial como los deshechos urbanos generan xenoestrógenos que contaminan
el ambiente. El desarrollo de metodologías para evaluar contaminación de los
sistemas hídricos y la caracterización de especies centinelas para detectar
exposición a xenoestrógenos, son de fundamental importancia. La vitelogenina
(Vtg) es una fosfoglicolipoproteína producida en el hígado de especies ovíparas
en respuesta a estrógenos. Resultados previos indican que machos de Caiman latirostris sintetizan Vtg en
respuesta a bajas dosis de 17b estradiol (E2). Nuestro
objetivo fue desarrollar un método de detección de Vtg de yacarés y profundizar
la caracterización de esta especie como centinela de contaminación por
xenoestrógenos. Obtuvimos
Vtg de plasma de hembras expuestas a altas dosis de E2.
La Vtg se identificó en geles de poliacrilamida por tinción con Coomassie blue
y Stains all y se purificó por precipitación con MgCl2 seguida por
cromatografía de intercambio iónico. La fracción purificada se sembró en geles
de poliacrilamida y se transfirió a membranas de nitrocelulosa. Para la
producción del anticuerpo anti-Vtg se inocularon conejos con la fracción de
nitrocelulosa pulverizada. En Western
blot y utilizando estándar purificado el anticuerpo generado mostró alta
sensibilidad detectando Vtg en el orden de 0.01mg. y alta linealidad (0 a 0.64 mg de Vtg , r: 0.918). Usando plasmas de yacarés
machos y hembras en condiciones basales y postestimulación con E2., el anticuerpo mostró
alta especificidad, resultando adecuado para evaluar bajos niveles circulantes de
Vtg. Los resultados obtenidos profundizan la caracterización de Caiman
latirostris como centinela de contaminación por xenoestrógenos.