INVESTIGADORES
CIVELLO Pedro Marcos
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de la actividad β-xilosidasa durante la maduración de frutilla.
Autor/es:
BUSTAMANTE CA; ROSLI HG; CIVELLO PM; MARTÍNEZ GA
Lugar:
Santa Rosa, La Pampa
Reunión:
Congreso; XXV Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2004
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal (SAFV)
Resumen:
Durante la maduración de los frutos carnosos se
producen una serie de cambios fisicoquímicos, entre los que se destaca un
ablandamiento progresivo. Precisamente, las principales causas de este
ablandamiento son los cambios y la degradación de los diferentes componentes de
la pared celular.
La frutilla es un fruto blando, con una velocidad de
maduración muy elevada y rápido ablandamiento, que determina una vida
postcosecha muy breve. Este proceso estaría asociado con un incremento en la
solubilidad de pectinas (Nogata, et al., 1996) y una reducción en la masa
molecular de hemicelulosas (Huber, 1984).
La xilosa es un componente abundante de la pared
celular vegetal, formando parte de las hemicelulosas y pectinas. Las
hemicelulosas están compuestas principalmente por xiloglucanos y xilanos. Los
xiloglucanos probablemente sean degradados por endoglucanasas (Brummel &
Harpster, 2001) mientras que los xilanos son degradados por la acción de endo b-1,4 xilanasa,
que ataca los enlaces glucosídicos b-1,4 entre D-xilosas para producir
xilooligosacáridos, y b-xilosidasa, la cual libera residuos de
D-xilosa a partir de los xilooligosacáridos (Cleemput et al., 1997). Si bien
los genes que codifican para xilanasas y b-xilosidasas han sido extensivamente
estudiados en hongos patogénicos (Margolles-Clark et al., 1996) es muy escasa
la información en plantas.
En el presente trabajo analizamos la actividad b-xilosidasa
durante la maduración del fruto de frutilla con el fin de establecer su posible
rol en el proceso de ablandamiento.
Trabajos previos realizados en nuestro laboratorio
permitieron obtener un fragmento de ADNc (denominado FAXyL1) que codifica para
una b-xilosidasa. Utilizando como sonda un fragmento de
FAXyL1 marcado con 32P-dATP se inició la búsqueda del ADNc completo
en una biblioteca de ADNc de frutos maduros. Como resultado de la misma se
obtuvo un clon 700 pb más largo a partir del extremo 5. El análisis filogenético de
la secuencia de aminoácidos predicha muestra una elevada identidad de secuencia
con xilosidas de plantas.
Cuando medimos actividad b-xilosidasa en distintas variedades de
frutilla, observamos que la misma es mayor para la variedad más blanda ,
mostrando en todos los casos un máximo en el estadio más maduro.
Para estudiar los niveles de proteína, se clonó un
fragmento de FAXyL1 en el vector de expresión pET24a. La proteína
sobreexpresada se purificó a partir de cuerpos de inclusión y se utilizó para
generar anticuerpos específicos en conejo. Análisis Western blot detectaron la
presencia de 3 bandas proteicas las cuales podrían corresponder a diferentes
isoenzimas. Una de ellas se mantendría constante a lo largo de la maduración
del fruto. Las otras, serían inducidas en los estadios más maduros del fruto,
siendo sus niveles superiores en la variedad más blanda.
Brummell, D. A. & Harpster, M.H. 2001. Plant Mol Biol 47:311-340.
Cleemput, G., et al. 1997. Plant
Physiol 113:377-386.
Huber, D. J. 1984. Jour of
Food Sci 49:1310-1315.
Margolles-Clark, E. et al. 1996. App Env Microbiol
62:3840-3846.
Nogata Y., et al. 1996. In: J Visser & AGJ Voragen
(Ed), Pectins & Pectinases. Els Sci, Amsterdan, 591-596.