Análisis de la respuesta innata desencadenada por flagelina en la mucosa intestinal

HIRIART YANINA,; RUMBO MARTIN

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LVI Reunion Anual Sociedad Argentina de Inmunologia; 2006

Sociedad Argentina de Inmunologia

La flagelina es el monómero constituyente del flagelo bacteriano y es reconocida por TLR5 desencadenando la expresión de genes proinflamatorios. Distintos tipos celulares son capaces de ser activados por el tratamiento con flagelina en forma exógena, entre ellos células de epitelios mucosales y células mieloides. La capacidad de flagelina de activar la respuesta innata in vivo, al ser administrada por vía luminal en el intestino, es controversial. El objetivo del presente trabajo fue analizar la respuesta de la mucosa intestinal empleando diferentes modos de administración. Se purificó flagelina de Salmonella enterica. Se emplearon cepas de ratones BALB/c y C3H/HeJ a los que se les administró flagelina en forma intragástrica (100 ug/ratón), intrarectal (100 ug/ratón) o intraperitoneal (10 ug/ratón). Se analizó la expresión de CCL20, CXCL2 y CXCL10 por RT-PCR en tiempo real sobre fragmentos de intestino o fracciones enriquecidas en epitelio intestinal por separación del epitelio con EDTA a 2hs del tratamiento con flagelina. Se determinaron los niveles de expresión de genes expresados exclusivamente en enterocitos (LI-cadherina, villina y pIgR) por la misma metodología como control del protocol de enriquecimiento. La administración intraperitoneal de flagelina generó un aumento (p<0.001) de los niveles de expresión de las quimoquinas analizadas de entre 60 y 300 veces, tanto en duodeno como en colon, dependiendo de la cepa de ratones y del gen analizado. La cepa C3H/HeJ presentó en todos los casos mayores aumentos que la cepa BALB/c (p<0.01). Los tratamientos intragástrico e intrarectal tuvieron un escaso impacto en la expresión de quimoquinas. Los niveles de expresión de CCL20 correlacionaron con los marcadores epiteliales pero su producción en colon no fue aumentada luego de la administración intraperitoneal con flagelina, en contraste con las otras quimoquinas analizadas. Los resultados indican que la mucosa intestinal es poco susceptible a la activación por administración de flagelina intraluminal, pudiendo atribuirse a la polarización en la expresión de TLR5 hacia el lado basolateral del epitelio. Si bien se observó una correlación de la respuesta de quimoquinas con los marcadores epiteliales, no se puede descartar el aporte indirecto de otros tipos celulares no epiteliales a la activación observada.