Diferente potencial de líneas de células madre embrionarias humanas para diferenciarse hacia linaje cardíaco

QUESTA M; SCASSA ME; FERNANDEZ ESPINOSA D; GUBERMAN AS; SEVLEVER GE; MIRIUKA SG

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

SAIC

Las células madre embrionarias (CME) humanas pueden diferenciarse eficientemente hacia cardiomiocitos. Las CME provenientes de diferentes líneas presentan una morfología similar, expresan marcadores de pluripotencialidad y son capaces de dar origen in vitro a progenitores de las tres capas germinales. Sin embargo, el desarrollo hacia un linaje específico y la eficiencia del proceso puede variar entre líneas celulares. En este estudio analizamos el potencial que presentan cuatro líneas humanas de ESC: H5, H9, H16 y S, para dar origen a cardiomiocitos. Las ESC fueron cultivadas sobre Matrigel en medio condicionado por fibroblastos embrionarios murinos, suplementado con 10% suero substituto (KSR) y bFGF con el objetivo de proveer una plataforma inicial estandarizada para su posterior análisis. La diferenciación se indujo a través de el cultivo en suspensión de cuerpos embrioides (CE) en medio conteniendo 20% de suero fetal bovino. El análisis por RT-PCR de los CE a los 7 días de iniciado el proceso de diferenciación reveló la inducción de genes cardíacos específicos como GATA-4, GATA-6, Nkx2.5, Islet-1 y Troponina T Cardíaca (cTnT). Notablemente, el porcentaje de CE contráctiles varió significativamente entre líneas celulares. Luego de 15 días se detectó la expresión de Péptido Natriurético Auricular, cTnT, GATA-4 y Nkx2.5 en los CE contráctiles, mediante inmunofluorescencia. Contrariamente, cuando los CE fueron generados en medio de cultivo de composición definida, éstos no presentaron zonas contráctiles, exhibiendo una reducida expresión de genes cardíacos y una aumentada expresión del marcador de ectodermo Pax-6. Este trabajo permitió identificar a la línea H5 como la de mayor potencial para diferenciarse hacia cardiomiocitos. La caracterización de líneas y el establecimiento de protocolos que permitan generar eficientemente cardiomiocitos funcionales representan un desafío para su aplicabilidad en terapias regenerativas.