Alteraciones celulares en un modelo tridimensional de células de adenocarcinoma de pulmón humano luego de la aplicación de ALA-TFD

TEIJO, MARÍA JULIETA; MEISS, ROBERTO; BATLLE, ALCIRA; FUKUDA, HAYDÉE

Mar del Plata

Congreso; LIX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SAIC; 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La administración de ácido 5-aminolevúlico (ALA) induce acumulación de porfirinas fotoactivas; la iluminación adecuada produce especies reactivas de oxígeno que llevan a la muerte celular, base de la Terapia Fotodinámica del cáncer (TFD). Los esferoides multicelulares (EMCs) son un modelo in vitro 3D útil para el estudio de terapias antitumorales independiente de la vasculatura. Se utilizó la línea A549 de adenocarcinoma de pulmón humano. Sembrando 5x104 cél/ml sobre agar 3%-RPMI (1:1) se obtuvieron esferoides compactos de 100-700 μm a los 7 días. Los EMCs se incubaron 3h con ALA 1mM y se irradiaron con 2 tubos fluorescentes. La síntesis de porfirinas (0,09±0,1 pg/cel) no varió significativamente con el cultivo en monocapa (0,109±0,1 pg/cel) . Su distribución en los distintos planos del esferoide es uniforme (microscopía confocal). La viabilidad celular post TFD (ensayo de fosfatasa ácida), indicó un corrimiento de 2 min de la DL50 para los EMCs. El fotodaño visualizado mediante diferentes métodos: tinción con NA/BE, Hoechst y H/E, mostró aumento de la granularidad del citoplasma, gran cantidad de núcleos condensados y con tinciones atípicas, pérdida de compactación de la estructura del EMC con desprendimiento de células muertas de la superficie. La tinción para mucopolisacáridos de secreción (PAS) indicó en EMCs no tratados fuerte marcación que se pierde luego de la TFD. La inmunodetección de Ki67, mostró en EMCs control un gradiente de células proliferativas desde la periferia hacia el centro. En los tratados, las células positivas se restringen a la periferia con morfología relativamente conservada. La expresión de HIF1α fue moderada y heterogénea con localización nuclear en EMCs control, la que se pierde con 10 y 20 min de irradiación. Los resultados muestran que la estructura interna y la diferenciación de las células en el EMC se ven alteradas por la TFD-ALA, señalando que el efecto no es únicamente superficial, sino también en las capas internas.