INVESTIGADORES
PETRUCCELLI Silvana
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de un anticuerpo monoclonal en plantas de tabaco y estudio de su glicosilación e immunogenecidad
Autor/es:
LAREU, F.,; CIRCOSTA, A.; PETRUCCELLI, SILVANA*,
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XI Congreso Argentino de Farmacia y Bioquímica Industrial. JorFyBI 2007; 2007
Institución organizadora:
Sociedad Argentino de Farmacia y Bioquímica Industrial.
Resumen:
Expresión de un anticuerpo monoclonal en plantas de
tabaco y estudio de su glicosilación e immunogenicidad.
Lareu,
Fabricio; Circosta, Ariana; Petruccelli,
Silvana
Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos.
CIDCA-UNLP-CONICET. Calle 47 y 116. La Plata. Bs. As. Tel/Fax: 0221-4249287. E-mail silvana@biol.unlp.edu.ar
Introducción.
Los anticuerpos monoclonales (mAb) se están convirtiendo en el grupo más
importante de proteínas para la industria farmacéutica estimándose un mercado de
30 billones US$ en el 2010. A diferencia de otras proteínas farmacéuticas
poseen una actividad específica muy baja, lo que determina que se deba recurrir
métodos de alta capacidad de producción. Aunque actualmente son producidos en
células CHOS, los costos de instalación y producción de estas de plantas son muy elevados. Las plantas
transgénicas son un sistema alternativo por
su bajo costo, seguridad, fácil scaling
up, capacidad de tolerar proteínas tóxicas para otros sistemas, etc.; aunque
poseen la desventaja de que los niveles de acumulación son bajos. Una
estrategia común para resolver este problema es retener el anticuerpo producido
en el retículo endoplásmico (RE), sin embargo se conoce escasamente el efecto
que esta retención produce en las propiedades del mAb. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto que tiene el empleo de una señal de
retención/recuperación en el RE (KDEL) en las propiedades de un mAb producido
en hojas y semillas.
Materiales y Métodos: los mAb fueron purificados a partir de hojas y semillas de plantas
transgénicas que producían un anticuerpo secretorio (sec-Ab) y fusionado a una
secuencia de retención en el RE (Ab-KDEL). Los mAbs purificados fueron analizados por Western Blot empleando anticuerpos específicos de glicanos
y MALDI-TOF. Se analizó la capacidad de
estos mAb de reconocer el antígeno, de interactuar con proteína A e inmunogenicidad
en ratones BALB/C.
Resultados:
los estudios de glicosilación por Western Blot y MALDI-TOF mostraron que
sec-Ab purificado de hojas (sec-AbL) poseía glicanos complejos conteniendo β1,2-xilosa,
α1,3-fucosa y epitopes Lewisa. En
cambio, Ab-KDELL
carecía de glicanos complejos siendo las formas predominantes Man 7 y Man 8,
consistentes con una recuperación eficiente
a partir del cis-Golgi (Figura 1). En cambio, ambos anticuerpos purificados de
semilla muestran glicanos complejos (sec-AbS y Ab-KDELS). Sec-AbL y Ab-KDELL interactúan de
igual manera con el hapteno, lo que
muestra una estructura Fab normal. En cambio, Ab-KDELL
muestra una interacción con proteína A más fuerte que sec-AbL, lo que indica una estructura Fc
alterada. Ab-KDELL es inmunogénico para ratones BALB/C, mientras
sec-AbL no lo es (figura
2). Estos animales muestran una respuesta inmune reducida contra glicanos por
los que la reactividad se puede atribuir a una estructura Fc alterada.
Conclusiones: aunque el empleo de una secuencia de retención en el RE produce un
incremento en los niveles de acumulación, la presencia de glicanos ricos en
manosa, junto con la
estructura del Fc e inmunogenicidad, indican
una limitada utilidad de los
Ab-KDELL, que no se observa en Ab-KDELS, cuyos niveles
de acumulación son elevados y no son retenidos en el RE sino transportados a
vacuolas.