Generación de una proteína quimérica con capacidad de unión a TLR4 y TLR5

HIRIART YANINA,; ROSSI ANDRE; GRISELDA MORENO; ERREA AGUSTINA; VANINA ALSOGARAY; BERGUER PAULA; FERNANDO GOLDBAUM; MARTIN RUMBO

Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2012

Los agonistas de distintos TLRs han cobrado interés en los últimos años por su potencial aplicación como adyuvantes vacunales. Lumazina sintetasa de Brucella abortus (BLS) es una proteína decamérica que actúa como carrier de antígenos fusionados a su extremo N-terminal y es capaz de activar y madurar células dendríticas vía TLR4. Flagelina (FliC) es el monómero estructural del flagelo bacteriano y por su capacidad agonista de TLR5 ha sido propuesta como adyuvante. El objetivo del presente trabajo fue la generación de una proteína de fusión entre ambas proteínas con la hipótesis que la combinación de ambos agonistas en una misma estructura generaría un producto con propiedades biólogicas de interés en el campo de los adyuvantes vacunales. Se generó una construcción con la inserción de una secuencia codificante para flagelina de S. tiphimurium en el extremo N-terminal de BLS. Se la expresó en un sistema bacteriano y purificó por cromatografía de afinidad utilizando anticuerpos monoclonales anti-flagelina generados en nuestro laboratorio. El análisis por SDS-PAGE mostró una banda del tamaño esperado (55 kDa) que mostró reactividad por westernblot con anticuerpos anti-FliC y anti-BLS. La quimera mostró capacidad agonista TLR5 al estimular la línea reportera Caco-CCL20-luciferasa, que responde a flagelina, pero no a otros agonistas de TLRs. La actividad agonista de TLR4 se demostró en un cultivo primario de células adherentes de bazo, poco respondedoras a agonistas TLR5, las que produjeron IL-6 frente a la estimulación con la quimera o con BLS. Luego de la estimulación por vía intranasal o peritoneal en animales C3H/HeJ, no respondedores vía TLR4, se analizaron las poblaciones reclutadas por citometría de flujo. En ambos casos el reclutamiento de neutrófilos en respuesta a la quimera fue comparable al inducido por flagelina. Los resultados obtenidos indican que se ha obtenido una proteína quimera BLS-FliC con capacidad agonista para las vías de TLR4 y TLR5 en la misma molécula, con potenciales aplicaciones en el campo de la vacunación.