Caracterización y aplicaciones de un panel de anticuerpos monoclonales anti-flagelina de Salmonella typhimurium

HIRIART YANINA,; GONZÁLEZ MACIEL, DOLORES; SAMPAOLESI SOFIA; SERRADELL MA; MARTIN RUMBO

Congreso; LIX Reunión de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011

La flagelina es el antígeno inmunodominante del flagelo bacteriano, tradicionalmente empleada para serotipificación de distintos géneros y especies microbianas. A su vez es agonista de los receptores de la respuesta innata TLR5, Naip5 e IPAF, por lo que resulta un candidato para ser empleado como adyuvante vacunal. Las preparaciones de flagelina pueden resultar contaminadas con LPS u otros productos microbianos activadores de otras vías de la respuesta innata. En trabajos anteriores hemos mostrado la generación y caracterizacion inicial de un panel de anticuerpos monoclonales (AcMo) anti-flagelina. El objetivo del presente trabajo es profundizar la caracterización de los distintos AcMo anti-flagelina y seleccionarlos para distintas aplicaciones. Se trabajó con 4 AcMo anti-flagelina de S. typhimurium: 2B3H10, 4C1H7, 2D11A1 y 5B4H2. Se observó reactividad por westernblot de 2B3H10 y 4C1H7 contra flagelina de distintas cepas de Salmonella (S. enteritidis, S. bredeney, S. newport, S. saintpaul) mientras que 2D11A1 y 5B4H2 reconocieron solo flagelina de S. typhimurium. No se observó reactividad por ELISA o WB contra flagelinas de otros microorganismos distintos a Salmonella (Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus, Bordetella pertussis, Bradirhizobium japonicum) De acuerdo a los perfiles de reactividad observados y con el fin de mejorar los sistemas de purificación de flagelina disponible, se seleccionó el AcMo 2B3H10, que fue conjugado a una resina comercial pre-activada para cromatografía de afinidad. El análisis por westernblot de la preparación de flagelina antes de la purificación empleando un suero anti-flagelina cruda mostró un perfil de bandas coincidente con la presencia de LPS mientras que la flagelina purificada mostró una única banda evidenciando la eficiencia del sistema de purificación. Por otro lado, se realizó la optimización de un ensayo de aglutinación de Salmonella con los AcMo 2B3H10, 4C1H7 y 5B4H2. Solo el anticuerpo 5B4H2 mostró capacidad de aglutinación, siendo esta a su vez específica para S. typhimurium. En conclusión, del panel se anticuerpos disponible fue posible seleccionar los más adecuados para mejorar los sistemas de purificación de flagelina y para la realización de ensayos rápidos de serotipificación.