L?expression de Nupr1 est nécessaire pour l?affranchissement de la sénescence induite par l?oncogène KRASG12D dans les cellules cancéreuses pancréatiques

DANIEL GRASSO; MARIA NOÉ GARCIA; TEWFIKHAMIDI; CANO CE; EZEQUIEL CALVO; GWEN LOMBERK; RAULURRUTIA; JUAN L IOVANNA

Monaco

Congreso; CLUB FRANÇAIS DU PANCREAS XXVII Réunion; 2012

CLUB FRANÇAIS DU PANCREAS

L?adénocarcinome pancréatique (PDAC) s?associe à une mortalité de presque 100%. Sur le plan histologique, cette tumeur démarre sur des lésions précancéreuses connues sous le nom de Pancreatic Intraepithelial Neoplasias (PanINs). La mutation de l?oncogène Kras est un événement quasi systématique dans les PDAC et il est accepté comme l?un des phénomènes initiateurs de la transformation cancéreuse pour la cellule pancréatique. A l?appui de cette hypothèse, la mutation ciblée dans le pancréas de l?oncogène Kras est capable d?induire la formation de lésions PanINs chez la souris transgénique Pdx1-cre;KrasG12D. Nupr1 est une protéine de stress indispensable à la formation des lésions PanINs chez la souris Pdx1-cre;KrasG12D car la délétion spécifique de son gène prévient leur développement. L?objectif de notre travail a été de disséquer les mécanises moléculaires par lesquels Nupr1 permet l?effet de l?oncogène Kras. Nous avons réalisé une analyse d?expression des gènes pancréatiques chez les souris Pdx1-cre;KrasG12D;Nupr1+/+ et Pdx1-cre;KrasG12D;Nupr1-/-, avant le développement des lésions PanINs, afin d?identifier les mécanismes qui seraient responsables de l?effet de Nupr1 dans la transformation cancéreuse pancréatique. Nous avons observé une diminution de l?ensemble des gènes impliqués dans le cycle cellulaire et une activation des gènes associes à la sénescence en absence de Nupr1. Dans la même ligne, nous avons identifié la présence de nombreuses cellules sénescentes dans les pancréas des souris Pdx1-cre;KrasG12D;Nupr1-/- par la mesure de l?activité beta-galactosidase. A l?aide des cellules MiaPaCa2 et grâce à l?utilisation du siRNA Nupr1, la mesure de l?activité beta-galactosidase, divers western blots et l?immunofluorescence, nous avons observé l?induction de la sénescence par une voie dépendante de p27 en association avec une forte diminution de la phosphorylation de Rb et de l?activité E2F. Par ailleurs, nous avons observé que l?expression de la DNA méthylase Dnmt1, l?enzyme qui éteigne l?expression de nombreux gènes par méthylation de leurs promoteurs, est dépendante de Nupr1. Nous avons ensuite démontré que l?utilisation du 5-az-dC (un inhibiteur chimique de la méthylation) montre des effets qui rappellent ceux de l?inactivation de Nupr1, en particulier sur l?expression de certains gènes suppresseurs de tumeur. Enfin, nous avons pu démontrer, par des expériences de sauvetage, que la réexpression forcée de Dnmt1, par transfection d?un plasmide, et que l?inhibition de l?expression de p27 par un siRNA, sont capables de récupérer les cellules de la sénescence induite par l?inactivation de Nupr1. L?ensemble de nos résultats nous indiquent que l?expression de Nupr1 permet l?activation de l?expression de Dnmt1 qu?à son tour éteigne l?expression de certains gènes suppresseurs de tumeurs et ainsi permet l?échappement de la sénescence induite par l?oncogène Kras. Nupr1 pourrait ainsi devenir une cible majeure dans le traitement du cancer du pancréas.