Sondas monocatenarias de ADN direccional para detectar inversiones con citogenetica molecular.

FARINI VERÓNICA L; SIPOWICZ PABLO; LAUDICINA ALEJANDRO; RADRIZZANI MARTIN

Mar del Plata

Congreso; ? LIII reunion cientifica anual de la sociedad argentina de investigacion clinica y reunion cientifica anual de la sociedad argentina de fisiologia (SAIC-SAFIS); 2008

SAIC-SAFIS

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:Arial; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-bidi-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Las inversiones cromosomicas cambian la orientación a los genes y pueden ocasionar una falla en la regulación de los mismos, transformación o mutación trayendo a consecuencia la muerte de la célula o una forma tumoral. Ninguna técnica citogenética  hasta hoy disponible como FISH, CGH, SKY FISH o PRINS podría detectarlas. Tampoco métodos como PCR o micro-arreglos de ADN. El desarrollo de sondas ?cromátide-especificas? permitiría observar las inversiones como un salto de una cromátide a la inversa y complementaria dentro de la región de manera tal que podrán ser fácilmente detectadas, desarrollando así una herramienta nueva para el análisis citogenético. Nuestra hipótesis de trabajo es que es posible fabricar una sonda unifilar direccionada para estudios citogenéticos. La metodología utilizada en este trabajo consiste en microdisecciones de cromosomas, su amplificación por PCR, la orientación de las cadenas en metafases unifilares y la microdisección de las cadenas positivas y negativas por separado. El modelo utilizado es el Cromosoma 9 humano por creerse que micro-inversiones son productoras de infertilidad masculina. Nuestros resultados muestran el desarrollo de una sonda centromérica para identificar el cromosoma 9, la microdisección de los brazos cromosómicos, su amplificación por PCR y el clonado en una biblioteca. Finalmente se lograron metafases unifilares de células sanguíneas humanas para orientar la biblioteca. Se discuten los métodos de obtención de sondas unifilares a partir de bibliotecas clonadas del cromosoma 9 comparando los resultados con solo microdisección y PCR.