Combinación de técnicas histológicas para identificar proteínas del metabolismo del hierro

GATTI CJ; DANNA CECILIA; VEUTHEY TANIA V; MARTA ELENA ROQUE

Congreso; XI Congreso Argentino Ciencias Morfológicas y I Congreso Internacional de Educación e Investigación en Ciencias Morfológicas; 2008

Ferroportina se encuentra altamente expresada en bazo de ratón sano y en hígado de ratón anémico. Su identificación por la técnica de inmunoperoxidasa es compleja ya que adquiere una coloración similar a la hemosiderina, proteína que se correlaciona directamente con los niveles de Fe del organismo. La colocalización de ambas proteínas en macrófagos hace poco útil el uso de cortes seriados. Nuestro objetivo fue desarrollar una técnica de doble marcación en un mismo corte histológico para identificar simultáneamente la presencia de Ferroportina y Hemosiderina. Se combinaron las técnicas de inmunoperoxidasa-DAB y la de Azul de Prusia para depósitos férricos (Perl). Protocolo: Bazo e hígado de ratones hembra (CF1) sanos y anémicos se fijaron en formol-buffer 10%. Secciones de 5 μm de muestras incluidas en parafina fueron procesadas para inmunohistoquímica utilizando un anticuerpo primario policlonal anti-Ferroportina de ratón, el complejo secundario y el sistema de revelación del kit EnVision+System-HRP (DAB). Posteriormente, se trataron con una solución ácida de ferrocianuro de potasio, contrastándose con rojo nuclear. De esta forma se pudo determinar la presencia de hemosiderina en las células positivas para Ferroportina. Los resultados experimentales obtenidos fueron altamente satisfactorios ya que en una misma célula se diferenció hemosiderina (azul) y expresión de Ferroportina (marrón). El uso de rojo nuclear, contraste característico de la técnica de azul de Prusia, resultó ser óptimo para contextualizar la inmunomarcación, evitando el uso de lacas de hematoxilina que dificultarían la caracterización de los depósitos de Fe, que toman coloración azul. El protocolo combinado resultó ser un método sencillo, reproducible y económico que permite visualizar en un mismo corte distintas proteínas del metabolismo del Fe y evita el uso de cortes seriados