Estabilización del foco en litografía fluorescente para microscopía fluorescente biocompatible

DARIO KUNIK; VERONICA PEREZ SCHUSTER; PATRICIO GRINBERG; S. CONSTANTINO; P. WISEMAN; OSCAR E. MARTINEZ

Villa Carlos Paz

Congreso; XXXIV reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2005

Sociedad Argentina de Biofísica

Recientemente ha sido desarrollada una técnica de litografía que permite producir patrones micrométricos fluorescentes adheridos a cubreobjetos de microscopio [1]. Estos patrones espaciales demostraron ser compatibles con cultivos de líneas celulares de mamíferos y cultivos primarios de neuronas (Figura 1). Por otra parte fueron utilizados como herramienta de calibración y como referencia espacial en microscopías por fluorescencia y confocal. Además, permiten resolver problemas de pérdida de foco por deriva térmica, sistemas de perfusión o inclinación del cubreobjetos. Para optimizar la calidad de estos patrones fluorescentes es necesario contar con un sistema de control de la altura del foco durante el proceso de la litografía. El cambio en la posición del foco durante el barrido del láser necesario para la fabricación limita el tamaño total de las muestras que se pueden producir e impide reducir el grosor de las estructuras polimerizadas debido a que obliga a trabajar por encima del umbral de polimerización. En este trabajo se presenta una técnica confocal para controlar la altura del foco. Las pruebas preliminares han demostrado que con este sistema de realimentación incorporado al microscopio se pueden fabricar patrones de más de 5 mm de longitud.