Mecanismos inmunológicos que intervienen en la infección de la glándula mamaria bovina por Staphyloccoccus aureus.

PEREYRA E.A.L.; RENNA M.S.; ANDREOTTI C.S.; BARAVALLE C.; CALVINHO L.F.; DALLARD B.E.

Esperanza, Santa Fe

Jornada; I Jornada de la difusión de la Investigación y Extensión en la FCV.; 2013

Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional del Litoral

La mastitis bovina es uno de los mayores factores limitantes a la rentabilidad de la producción lechera en el mundo. Si bien la enfermedad es causada por numerosos agentes etiológicos, Staphylococcus aureus, es el principal causante de infecciones intramamarias (IIM) en bovinos en Argentina como en otros países de gran desarrollo lechero. Estudios recientes han demostrado la asociación entre genotipos y factores de virulencia de S. aureus con las manifestaciones clínicas y comportamiento epidemiológico de las IIM causadas por este microorganismo, que ponen en perspectiva atributos que favorecerían la persistencia de las infecciones mamarias. En nuestro grupo de trabajo, la hipótesis general planteada se basa en que la patogenia de las IIM causadas por S. aureus y su persistencia in vivo está asociada, por un lado, a factores de virulencia del patógeno que actúan de manera coordinada para lograr la evasión de la respuesta inmune; y por otro lado, a mecanismos que involucran la respuesta inmune innata y adaptativa por parte del huésped. Por lo tanto, ambos factores determinan la supervivencia intracelular de la bacteria, la diseminación de la misma, la resistencia a los tratamientos antibióticos y en consecuencia la cronicidad del proceso infeccioso. En relación a la hipótesis planteada, el objetivo general que se propone es investigar los los factores de virulencia implicados en la infección de la glándula mamaria bovina por Staphylococcus aureus y establecer asociaciones entre los genotipos bacterianos y el desarrollo de la respuesta inmune tras la infección experimental en un modelo murino. Además, se proponen los siguientes objetivos específicos: a) Seleccionar dos cepas de S. aureus sobre la base de su comportamiento clínico (mastitis clínica o subclínica), prevalencia en el rodeo lechero de origen (alta o baja), respuesta a la terapia antibiótica (favorable o desfavorable), producción de polisacáridos capsulares (PC), producción de β-lactamasa, producción de toxinas y genotipo, que permitan diferenciarlas como de alta difusión en el rodeo y tendencia a la cronicidad y baja difusión y favorable respuesta al tratamiento antibiótico. B) Evaluar in vitro en una línea de células epiteliales mamarias bovinas (MAC-T) la adherencia/ internalización de las cepas seleccionadas y establecer diferencias entre las mismas. C) Asociar capacidad de infección de S. aureus en MAC-T con niveles de expresión de genes involucrados en la adhesión e invasión celular. D) Desarrollar un modelo de mastitis en ratón con dos cepas de S. aureus diferenciadas según los criterios establecidos anteriormente. E) Evaluar in vivo en un modelo murino el nivel de infección, los cambios histológicos y la reacción inflamatoria inducida por las cepas seleccionadas tras la inoculación experimental y establecer diferencias entre las mismas. F) Evaluar el tipo de respuesta inmune generada por el huésped tras la inoculación experimental de las bacterias seleccionadas y establecer diferencias entre cepas. Las cepas de S. aureus para la realización de los ensayos in vitro e in vivo, fueron seleccionadas entre una colección de 300 aislamientos, sumados a información epidemiológica y clínica obtenida a partir de estudios realizados recientemente y al aporte del seguimiento clínico efectuado sobre 3 rodeos lecheros ubicados en la Provincia de Santa Fe. Los estudios mencionados se realizaron en el marco de un Proyecto PICT-2010 (No 0872), actualmente en ejecución. Del total de los aislamientos, se seleccionaron 12 cepas de baja adaptación a la glándula mamaria (transitorias) aisladas de mastitis clínicas y 21 cepas con alta adaptación a la glándula mamaria (persistentes). Las cepas seleccionadas fueron caracterizadas fenotípicamente por procedimientos estándares y genéticamente utilizando pruebas de electroforesis en gel de campos pulsantes (PFGE). A partir de los dendogramas obtenidos se seleccionaron cuatro cepas con genotipos diferentes, dos de baja adaptación a la glándula mamaria (A y B) y dos de alta adaptación a la glándula mamaria (C y D). Para la selección también se tuvieron en cuenta datos epidemiológicos del rodeo de origen y recuento de células somáticas (RCS) promedio. Las cepas A y C provenían de tambos con baja prevalencia de mastitis por S. aureus (500.000 cél/ml). Para evaluar la internalización y establecer diferencias entre cepas, monocapas de MAC-T fueron infectadas con las 4 cepas seleccionadas. Los porcentajes de internalización difirieron entre las cepas evaluadas (p