Expresión de Proteínas Heterólogas de Interés Biotecnológico en Diferentes Levaduras

GIANOTTI, ALEJO R.; BRUM, LUCIANO A.; SAMUS, IVÁN; ERMÁCORA, MARIO R.; FERREYRA, RAUL G.

Bernal

Jornada; Primeras Jornadas de Doctorandos y Estudiantes Avanzados de C y T; 2013

Departamento de Ciencia y Tecnología, Universidad Nacional de Quilmes

Yarrowia lipolytica, una levadura con acentuado metabolismo lipídico, es modelo de estudio en secreción de proteínas, biogénesis de peroxisomas, dimorfismo fúngico, utilización de sustratos hidrofóbicos y áreas aplicadas; su genoma fue secuenciado completamente. Las proteínas transportadoras de esteroles (SCP-2) son portadores lipídicos no específicos implicados en la transferencia y metabolismo de colesterol, ácidos grasos de cadena ramificada, ésteres de CoA y otros lípidos, encontrándose en todos los Dominios de la vida. El gen que codifica SCP-2 de Y. lipolytica (YLSCP-2) fue clonado en nuestro laboratorio y expresado en Escherichia coli. YLSCP-2 es una proteína soluble de 128 residuos, inducible por ácidos grasos, y que une diferentes lípidos [1]. Se localiza en los peroxisomas de la levadura y es capaz de transferir los lípidos unidos hacia membranas fosfolipídicas por un mecanismo mediado por colisiones [2]. Saccharomyces cerevisiae carece de SCP-2 y presenta dificultades para asimilar lípidos como única fuente de carbono, ya que requiere prolongada adaptación para la proliferación de peroxisomas. Disponemos así de un sistema para estudiar su función in vivo. YLSCP-2 fue expresada desde el vector p416GPD, evaluándose sus consecuencias. Asimismo, recurrimos a la expresión en Pichia pastoris para identificar glicosilaciones en la variante IA-2ec449-576 (Ectodomino Maduro, ICA512) [3]. [1] Ferreyra et al. (2006) A Yeast Sterol Carrier Protein with Fatty-Acid and Fatty-Acyl-CoA Binding Activity, Arch. Biochem. Biophys., 453(2), 197-206. [2] Falomir et al. (2009) Biophysical Characterisation and Urea-Induced Unfolding of Recombinant Yarrowia lipolytica Sterol Carrier Protein-2, Biophys. J., 97(1), 248-56. [3] Primo et al. (2011) Protein-Protein Interactions in Crystals of the Human Receptor-Type Protein Tyrosine Phosphatase ICA512 Ectodomain, PLoS One, 6 (9) e24191, 1-8. Eje: Bioquímica y Biología Celular y Estructural.Ingeniería Genética y Biología Molecular.