Molecular Cloning of AgMNPV ie1 gene and functional analysis of promoter region

BILEN MARCOS; PILLOFF MARCELA; RIBEIRO BERGMAN MORAIS; ROMANOWSKY VICTOR; LOZANO MARIO ENRIQUE; GHIRINGHELLI DANIEL

Viña del mar

Congreso; XXXVI Reunión Anual SAIB (Sociedad Argentina de investigación en Bioquímica y Biología Molecular)- Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular; 2000

A. gemmatalis (Lep. Noctuidae), es una de las principales pestes de la soja en América del Sur. Un nucleopoliedrovirus (AgMNPV) aislado en Brasil demostró ser un posible agente de control microbiano. Este baculovirus se usa actualmente en más de un millón de hectáreas en Brasil. Sin embargo, el tiempo letal prolongado limita su aceptación. Mediante técnicas de DNA recombinante podría alterarse su patogenicidad, introduciendo genes codificantes para toxinas, hormonas de insecto, etc. y/o eliminando genes virales específicos. El uso del promotor de ie1 para manejar la expresión de genes foráneos es una idea atractiva que ha tenido éxito en otros sistemas baculovirus-insecto. El locus ie1 de AgMNPV está ubicado en un fragmento genómico BglII/XhoI de 2396 pb, que contiene los 1707 pb correspondientes al ORF ie1 y las regiones regulatorias upstream y downstream. La proteína IE1 de AgMNPV tiene más del 60% de identidad aminoacídica con las de otros baculovirus. Por otra parte, con la finalidad de realizar estudios básicos de la cinética transcripcional se construyeron plásmidos recombinantes con genes reportadores, tales como LacZ, bajo el control del promotor de ie1. Estas tareas iniciales, permiten sentar las bases para evaluar la factibilidad de la construcción de vectores de transferencia aptos para el clonado de genes foráneos bajo el control del promotor de ie1.