Diseño de un generador de heterodúplex para la detección de mutaciones puntuales del exón 1 del oncogen NRAS

BELLI, CAROLINA; DE BRASI, CARLOS; LARRIPA, IRENE

Buenos Aires

Congreso; Congreso de la Sociedad Argentina de Genética. SAG 2002; 2002

Sociedad Argentina de Genética

Las mutaciones puntuales del oncogen N-ras han sido reportadas en varios tumores y enfermedades hematológicas. Existen numerosos métodos para el análisis de dichas mutaciones. Sin embargo, todos ellos presentan desventajas asociadas a la especificidad y/o sensibilidad. Este trabajo describe la aplicación de un nuevo método para la detección de las mutaciones puntuales de los codones 12 y 13 del oncogén N-ras basado en el comportamiento electroforético diferencial de los heterodúplex inducidos entre la muestra incógnita y un generador sintético (HG). El HG contiene una inserción (CCC) capaz de discriminar las 12 mutaciones (panel de plásmidos mutantes) de la secuencia normal con una sensibilidad estimada del 6% (mediante experimentos de dilución de ADN genómico normal y mutado). Además, el método fue corroborado en pacientes con mutaciones previamente caracterizadas. La técnica resultó altamente específica, sensible y reduce apreciablemente tiempos y costos, debido a que sólo requiere amplificaciones por PCR, la formación inducida de heterodúplex y una electroforesis en minigel de poliacrilamida no desnaturalizante. Este método representa una mejor alternativa para la detección de las mutaciones de los codones 12 y 13 del oncogen N-ras, facilmente aplicable tanto para análisis de grandes series clínicas como a la rutina diagnóstica.