Regulación del volumen celular en células del túbulo colector: Rol de la AQP2 y del TRPV4 (Transient Receptor Vanilloid 4).

LUCIANO GALICIA; PILAR FLAMENCO; VALERIA RIVAROLA; CLAUDIA CAPURRO; PAULA FORD

MAR DEL PLATA, ARGENTINA

Congreso; la 53 Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2008

La mayoria de las células responden a la hipotonia primero aumentando su volumen y luego iniciando mecanismos que les permiten restablecer su volumen original. Este mecanismo llamado "regulatory volume decrease" (RVD) depende de la activación de permeabilidades iónicas que revierten el gradiente osmótico y la dirección del flujo de agua. Sin embargo los mecanismos implicados en sensar el cambio de osmolaridad y/o de volumen para iniciar el RVD no estan completamente comprendidos. Nosotros describimos por primera vez que la AQP2 es fundamental para el RVD en células renales. Recientemente demostraos que la AQ2 actuaría facilitando la activacion de una via de entrada de calcio necesaria para activar los transportadores involucrados en el RVD (Galizia et al, 2008, Am J Physiol Renal Physiol 294: F582-F590). El TRPV4 ha sido descrito como un canal catiónico permeable a calcio y activado por volumen. Investigar la participacion del mismo en la entrada de calcio, estimulada por AQP2 en respuesta a la hipotonía, es el objetivo de este trabajo. Utilizando microscopía de fluorescencia investigamos los cambios en la concentración de calcio y en el volumen celular en respuesta a la hipotonía en dos líneas de túbulo colector de rata WT-RCCD1 (no expresa AQP2) y AQP2-RCCD1 (transfectada con AQP2). Encontramos que utilizando un inhibidor de canales TRPV (rojo de rutenio) se pierde el aumento intracelular de calcio característico de la respuesta a la hipotonia de las células AQP2-RCCD1 y en consecuencia la RVD es incompleta. Por otra parte experimentos de RT-PCR y Western Blot mostraron expresión de TRPV4 en los dos tipos celulares. Utilizando un activador específico de TRPV4 (4-forbol 12,13 didecanoato) comprobamos su funcionalidad. Concluimos que el TRPV4 se expresa y es funcional en los dos tipos celulares sin embargo solo se activaría en respuesta a la hipotonía cuando AQP2 esta presente en la membrana.