Muerte celular inducida por la adaptación a la alcalosis en células de tubulo colector renal.

V. RIVAROLA; MP. FLAMENCO; L. GALIZIA; P. FORD; C. CAPURRO

Mar del Plata, Argentina

Congreso; 52 Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica. 2007.; 2007

SAIC, SAI, SAFisiol

La homeostasis ácido-base del organismo es mantenida en gran medida por los túbulos colectores del riñón de mamífero (CD). Sin embargo, existen varias patologías que producen un desbalance crónico del equilibrio ácido-base. Previamente demostramos que las células RCCD1, modelo de CD, son capaces de adaptarse a una alcalosis de 48 h reestableciendo su pHi a pesar de la existencia de una alcalosis extracelular continua. Recientemente demostramos, que las células RCCD1 responden a la alcalosis crónica con una disminución en el número de células, un aumento de su área celular y su contenido de ADN. Nuestro siguiente objetivo fue evaluar si esta alteración del crecimiento se debía a un aumento de la muerte celular. Para estos estudios se cultivaron monocapas de células RCCD1 durante diferentes tiempos de alcalosis (24 a 96 horas) y luego se evaluaron diferentes parámetros de muerte celular. Nuestros resultados muestran que la exposición a un medio alcalino por agregado de NaHCO3 durante 48 h. induce un aumento de la muerte celular por tinción con Naranja de Acridina/Bromuro de Etidio (% células muertas: Alcalosis = 6.74±2.37 vs Control = 1.42±0.31, n=12, p<0.05). Esta muerte podría ser apoptótica dado que, en geles de agarosa con ADN cromosómico de células cultivadas en las mismas condiciones, se observó la fragmentación de ADN. Por otra parte se procedió evaluar el contenido de ADN hipodiploide por citometría de flujo en células teñidas con ioduro de propidio. Aqui no se observó muerte celular a las 24 h pero si a las 48 h (alcalosis 26±3% con respecto al control, n=4, p<0.01). Además al adaptar las células RCCD1 durante un tiempo mayor, el % de muerte celular fue incrementándose (~ 56% y 74% con respecto al control a las 72 h y 96 h respectivamente). Por lo tanto concluimos que, en las células RCCD1, la disminución del crecimiento celular luego de adaptarse a la alcalosis podría ser el resultado de una mayor tasa de apoptosis.